| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-17页 |
| 第1章 绪论 | 第17-34页 |
| ·MiRNA介绍 | 第17-20页 |
| ·概述 | 第17页 |
| ·MiRNA的生物合成机制 | 第17-18页 |
| ·MiRNA的功能及其作用机制 | 第18-19页 |
| ·MiRNA的鉴定方法 | 第19页 |
| ·MiRNA的检测方法 | 第19-20页 |
| ·MiRNA与癌症 | 第20-27页 |
| ·概述 | 第20页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞凋亡的关系 | 第20-21页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞自噬的关系 | 第21-22页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞血管新生的关系 | 第22页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞周期的关系 | 第22-23页 |
| ·MiRNA与细胞老化的关系 | 第23-24页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞浸润转移的关系 | 第24-26页 |
| ·MiRNA与肿瘤细胞耐药的关系 | 第26-27页 |
| ·MiRNA在癌症中的应用 | 第27-30页 |
| ·概述 | 第27页 |
| ·MiRNA在癌症诊断和预后中的应用 | 第27-29页 |
| ·MiRNA在癌症治疗中的应用 | 第29-30页 |
| ·研究目标、内容、创新点和意义 | 第30-34页 |
| ·研究目标 | 第30页 |
| ·研究内容 | 第30-32页 |
| ·研究意义和创新点 | 第32-34页 |
| 第2章 人结肠癌病例与细胞株中异常表达miRNA的研究 | 第34-42页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-37页 |
| ·细胞株的培养 | 第34-35页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的收集及保存 | 第35页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的总RNA及miRNA提取 | 第35页 |
| ·miRNA芯片筛选人结肠癌病例与人正常结肠组织中异常表达的miRNA | 第35页 |
| ·实时荧光定量PCR检验miRNA芯片结果 | 第35-36页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌细胞株中异常表达的miRNA | 第36页 |
| ·统计分析 | 第36-37页 |
| ·实验结果 | 第37-41页 |
| ·不同病理分型的人结肠癌病例中miRNA的表达谱 | 第37-38页 |
| ·MiR-139-5p在34例人结肠癌病例组织中的表达量 | 第38-39页 |
| ·MiR-139-5p在6例人结肠癌细胞株中的表达量 | 第39-40页 |
| ·MiR-139-3p在34例人结肠癌病例组织中的表达量 | 第40页 |
| ·MiR-139-3p在6例人结肠癌细胞株中的表达量 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第3章 MiR-139-5p调控人结肠癌细胞增殖与浸润转移能力的研究 | 第42-56页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-45页 |
| ·细胞株的培养 | 第42-43页 |
| ·MiRNA过表达质粒的构建 | 第43页 |
| ·实时荧光定量PCR检测细胞内miRNA表达量 | 第43页 |
| ·MTT实验检测细胞体外增殖能力 | 第43-44页 |
| ·Transwell小室实验检测细胞体外浸润转移能力 | 第44页 |
| ·细胞划痕愈合实验检测细胞体外迁移能力 | 第44页 |
| ·裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内增殖能力 | 第44页 |
| ·裸鼠肝脏转移实验检测细胞体内浸润转移能力 | 第44-45页 |
| ·H&E染色实验观察裸鼠肝转移灶 | 第45页 |
| ·统计分析 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-54页 |
| ·MiR-139-5p表达量与人结肠癌患者临床病理特征的相关性 | 第45-46页 |
| ·MiR-139对人结肠癌细胞体外增殖能力的调控作用 | 第46-48页 |
| ·MiR-139对人结肠癌细胞体外浸润转移能力的调控作用 | 第48-50页 |
| ·MiR-139对人结肠癌细胞体内增殖能力的调控作用 | 第50-52页 |
| ·MiR-139对人结肠癌细胞体内浸润转移能力的调控作用 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第4章 MiR-139-5p靶基因IGF1R的相关研究 | 第56-68页 |
| ·引言 | 第56-57页 |
| ·材料与方法 | 第57-60页 |
| ·细胞株的培养 | 第57页 |
| ·生物信息学预测miR-139-5p靶基因 | 第57页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的收集及保存 | 第57页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的RNA提取 | 第57页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌病例中IGF1R的表达量 | 第57-58页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR-139的靶基因mRNA水平调控能力 | 第58页 |
| ·蛋白质印迹法检测miR-139的靶基因蛋白水平调控能力 | 第58页 |
| ·双荧光素酶报告基因法检测miR-139-5p与靶基因的结合位点 | 第58-59页 |
| ·MTT实验检测细胞体外增殖能力 | 第59-60页 |
| ·Transwell小室实验检测细胞体外浸润转移能力 | 第60页 |
| ·统计分析 | 第60页 |
| ·实验结果 | 第60-66页 |
| ·MiR-139-5p靶基因的预测 | 第60-61页 |
| ·MiR-139能够调控靶基因IGF1R的mRNA表达量 | 第61-62页 |
| ·MiR-139能够调控靶基因IGF1R的蛋白表达量 | 第62页 |
| ·MiR-139-5p通过作用于IGF1R的3'UTR调控靶基因IGF1R的表达 | 第62-64页 |
| ·IGF1R与miR-139-5p表达量在34例人结肠癌病例组织中的关联性 | 第64页 |
| ·IGF1R对人结肠癌细胞体外增殖能力的调控作用 | 第64-65页 |
| ·IGF1R对人结肠癌细胞体外浸润转移能力的调控作用 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第5章 MiR-139-5p调控人结肠癌细胞浸润转移的分子机理研究 | 第68-78页 |
| ·引言 | 第68-69页 |
| ·材料与方法 | 第69-71页 |
| ·细胞株的培养 | 第69页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR-139-5p对MMP-2和MMP-9的mRNA水平调控能力 | 第69页 |
| ·蛋白质印迹法检测miR-139-5p对MMP-2和MMP-9的蛋白水平调控能力 | 第69页 |
| ·明胶酶谱法检测miR-139-5p对MMP-2和MMP-9的蛋白活性调控能力 | 第69-70页 |
| ·双荧光素酶报告基因法检测miR-139-5p调控MMP-2启动子活性的能力 | 第70-71页 |
| ·蛋白质印迹法检测miR-139-5p调控下游MEK/ERK通路的能力 | 第71页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的收集及保存 | 第71页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的RNA提取 | 第71页 |
| ·实时荧光定量PCR检测病例中miR-139-5p,IGF1R和MMP-2的mRNA表达量 | 第71页 |
| ·统计分析 | 第71页 |
| ·实验结果 | 第71-76页 |
| ·MiR-139-5p能够调控MMP-2的mRNA表达量 | 第71-72页 |
| ·MiR-139-5p能够调控MMP-2的蛋白表达量 | 第72-73页 |
| ·MiR-139-5p能够调控MMP-2的蛋白活性 | 第73页 |
| ·MiR-139-5p能够调控MMP-2启动子的转录活性 | 第73-74页 |
| ·MiR-139-5p对靶基因IGF1R下游MEK/ERK信号通路的影响 | 第74-75页 |
| ·MMP-2,IGF1R和miR-139-5p表达量在34例人结肠癌病例组织中的关联性 | 第75-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第6章 MiR-139-5p在人结肠癌细胞中异常低表达的分子机理研究 | 第78-95页 |
| ·引言 | 第78-79页 |
| ·材料与方法 | 第79-82页 |
| ·细胞株的培养 | 第79页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的收集及保存 | 第79页 |
| ·人结肠癌及正常组织标本的RNA提取 | 第79页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌病例中PDE2A的表达量 | 第79页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌细胞株中PDE2A的表达量 | 第79页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌病例中pre-miR-139的表达量 | 第79页 |
| ·实时荧光定量PCR检测PDE2A激活剂对pre-miR-139和PDE2A表达量的调控作用 | 第79页 |
| ·染色质免疫共沉淀法检测miR-139启动子结合因子 | 第79-80页 |
| ·实时荧光定量PCR检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂及DNA甲基化转移酶抑制剂对pre-miR-139和PDE2A的调控作用 | 第80页 |
| ·实时荧光定量PCR检测靶基因3'UTR对miR-139表达量的调控能力 | 第80-81页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌病例中ROCK2及RAP1B的表达量 | 第81页 |
| ·实时荧光定量PCR检测靶基因3'UTR对其他miRNA表达量的调控能力 | 第81-82页 |
| ·统计分析 | 第82页 |
| ·实验结果 | 第82-93页 |
| ·PDE2A与miR-139前体及成熟体表达量在34例人结肠癌病例组织中的关联性 | 第82-83页 |
| ·PDE2A表达量与人结肠癌患者临床病理特征的相关性 | 第83-85页 |
| ·PDE2A在6例人结肠癌细胞株中的表达量 | 第85-86页 |
| ·PDE2A激活剂对miR-139表达量的调控作用 | 第86-87页 |
| ·MiR-139具有独立启动子 | 第87页 |
| ·表观遗传学调控因素对miR-139表达量的影响 | 第87-89页 |
| ·Pre-miR-139在34例人结肠癌病例组织中的表达量 | 第89-90页 |
| ·靶基因3'UTR对miR-139-5p表达量的调控能力 | 第90-91页 |
| ·ROCK2及RAP1B表达量在34例人结肠癌病例组织中的关联性 | 第91-92页 |
| ·靶基因3'UTR对其他所结合miRNA表达量的调控能力 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第7章 MiR-139-5p靶基因间相互调控的分子机理研究及靶基因3’UTR生物学功能的研究 | 第95-109页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·材料与方法 | 第96-98页 |
| ·细胞株的培养 | 第96页 |
| ·蛋白质印迹法检测靶基因3'UTR的蛋白水平调控能力 | 第96页 |
| ·荧光素酶报告基因法检测靶基因3’UTR的调控能力 | 第96-97页 |
| ·实时荧光定量PCR检测miR-139-5p表达量 | 第97页 |
| ·蛋白质印迹法检测Dicer siNRA对靶基因蛋白表达量 | 第97页 |
| ·MTT实验检测细胞体外增殖能力 | 第97页 |
| ·软琼脂克隆形成法检测细胞体外增殖能力 | 第97-98页 |
| ·Transwell小室实验检测细胞体外浸润转移能力 | 第98页 |
| ·蛋白质印迹法检测靶基因3'UTR对自身及其它靶基因下游信号通路的调控能力 | 第98页 |
| ·统计分析 | 第98页 |
| ·实验结果 | 第98-107页 |
| ·MiR-139-5p靶基因IGF1R,ROCK2和RAP1B表达量在34例人结肠癌病例组织中的关联性 | 第98-100页 |
| ·MiR-139-5p靶基因3'UTR具有调控其他靶基因蛋白表达量的能力 | 第100-102页 |
| ·MiR-139-5p是靶基因间相互调控的关键信号分子 | 第102-103页 |
| ·MiR-139-5p靶基因3'UTR对人结肠癌细胞体外增殖能力的调控作用 | 第103-105页 |
| ·MiR-139-5p靶基因3'UTR对人结肠癌细胞体外浸润转移能力的调控作用 | 第105-106页 |
| ·MiR-139-5p靶基因3'UTR对其他靶基因下游信号通路的影响 | 第106-107页 |
| ·讨论 | 第107-109页 |
| 第8章 靶基因IGF1R逆转人结肠癌细胞多药耐药的分子机理研究 | 第109-127页 |
| ·引言 | 第109-110页 |
| ·材料与方法 | 第110-112页 |
| ·细胞株的培养 | 第110页 |
| ·人结肠癌多药耐药细胞对抗肿瘤药物耐药能力的测定 | 第110页 |
| ·蛋白质印迹法检测人结肠癌多药耐药细胞中相关耐药蛋白的表达量 | 第110页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌多药耐药细胞中IGF1R的mRNA表达量 | 第110页 |
| ·蛋白质印迹法检测人结肠癌多药耐药细胞中IGF1R的蛋白表达量 | 第110页 |
| ·MTT实验检肿瘤细胞体外增殖能力 | 第110-111页 |
| ·流式细胞仪检测细胞周期 | 第111页 |
| ·流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第111页 |
| ·Hoechst染色法检测细胞凋亡 | 第111页 |
| ·原子光谱法检测细胞内铂离子含量 | 第111页 |
| ·高效液相色谱法检测细胞内长春新碱含量 | 第111-112页 |
| ·蛋白质印迹法检测IGF1R及其下游信号通路 | 第112页 |
| ·荧光素酶报告基因法检测MRP-2启动子活性 | 第112页 |
| ·实时荧光定量PCR检测MRP-2的mRNA表达量 | 第112页 |
| ·统计分析 | 第112页 |
| ·实验结果 | 第112-124页 |
| ·多药耐药细胞株的验证 | 第112-114页 |
| ·IGF1R在人结肠癌多药耐药细胞中的表达量 | 第114-115页 |
| ·IGF1R对人结肠癌多药耐药细胞体外增殖能力的调控作用 | 第115-116页 |
| ·IGF1R对人结肠癌多药耐药细胞细胞周期的影响 | 第116-117页 |
| ·IGF1R可以调节人结肠癌多药耐药细胞的凋亡并及对抗肿瘤药物的敏感性 | 第117-120页 |
| ·IGF1R下游信号通路调控人结肠癌多药耐药细胞对抗肿瘤药物敏感性的能力 | 第120-122页 |
| ·IGF1R能够调控MRP-2的转录活性 | 第122-124页 |
| ·讨论 | 第124-127页 |
| 第9章 MiR-139-5p逆转人结肠癌细胞多药耐药的分子机理研究 | 第127-139页 |
| ·引言 | 第127页 |
| ·材料与方法 | 第127-129页 |
| ·细胞株的培养 | 第127页 |
| ·实时荧光定量PCR检测人结肠癌多药耐药细胞中miR-139-5p的表达量 | 第127页 |
| ·MTT实验检测细胞体外增殖能力 | 第127-128页 |
| ·克隆形成法检测细胞体外增殖能力 | 第128页 |
| ·MTT实验检测细胞对抗肿瘤药物敏感性 | 第128页 |
| ·流式细胞仪检测肿瘤干细胞表面标志物表达量 | 第128页 |
| ·蛋白质印迹法检测miR-139的靶基因蛋白水平调控能力 | 第128页 |
| ·双荧光素酶报告基因法检测miR-139-5p与靶基因的结合位点 | 第128页 |
| ·统计分析 | 第128-129页 |
| ·实验结果 | 第129-137页 |
| ·MiR-139-5p表达量在人结肠癌多药耐药细胞中的表达量 | 第129页 |
| ·MiR-139-5p对人结肠癌多药耐药细胞体外增殖能力的调控作用 | 第129-130页 |
| ·MiR-139-5p可以调节人结肠癌多药耐药细胞对抗肿瘤药物的敏感性 | 第130-132页 |
| ·结肠癌多药耐药细胞具有肿瘤干细胞特性 | 第132-134页 |
| ·MiR-139-5p通过作用于Notch-1的3'UTR调控靶基因Notch-1的表达 | 第134-135页 |
| ·Notch-1可以调节人结肠癌多药耐药细胞对抗肿瘤药物的敏感性 | 第135-137页 |
| ·讨论 | 第137-139页 |
| 第10章 结论 | 第139-141页 |
| 参考文献 | 第141-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
| 在读期间发表论文和专利情况 | 第166-167页 |
