| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 缩写词表 | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-18页 |
| ·鸭肝炎病毒的分类与流行 | 第9-10页 |
| ·鸭肝炎病毒的病原特性 | 第10页 |
| ·DHV的形态和理化特性 | 第10页 |
| ·病毒的增殖和培养 | 第10页 |
| ·DHV诊断技术的研究 | 第10-13页 |
| ·DHV病毒分离技术 | 第11页 |
| ·血清型诊断技术 | 第11-13页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第13页 |
| ·DHV的基因组结构及病毒蛋白功能 | 第13-16页 |
| ·鸭病毒性肝炎防制及存在的问题 | 第16-17页 |
| ·主动免疫 | 第16-17页 |
| ·被动免疫 | 第17页 |
| ·存在的问题 | 第17页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 鸭肝炎病毒VP1基因的原核表达 | 第18-37页 |
| ·试验材料 | 第18-19页 |
| ·毒株、血清及鸭胚 | 第18页 |
| ·载体和细胞 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第19-27页 |
| ·DHV的繁殖、纯净性检验及含量测定 | 第19-20页 |
| ·目的基因的扩增 | 第20-22页 |
| ·VP1基因PCR产物TA克隆重组质粒(pMD19-T-VP1)的构建与鉴定 | 第22-24页 |
| ·pET-32a-VP1重组表达质粒的构建 | 第24-25页 |
| ·重组菌的诱导及表达产物的鉴定 | 第25-27页 |
| ·实验结果 | 第27-33页 |
| ·DHV的繁殖、纯净性检验及含量测定 | 第27-28页 |
| ·目的基因的扩增 | 第28页 |
| ·pMD19-T-VP1重组质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·pET-32a-VP1重组表达质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·pET-32a-VP1重组表达质粒转入BL21(DE3)后二次鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组菌诱导表达鉴定 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| ·关于表达系统和表达载体的选择 | 第33页 |
| ·关于蛋白表达过程中方法的摸索 | 第33-34页 |
| ·关于表达宿主菌的选择 | 第34页 |
| ·影响目的蛋白表达的因素 | 第34-35页 |
| ·关于重组蛋白的变性复性 | 第35-36页 |
| ·关于重组蛋白没有反应性的分析 | 第36页 |
| ·重组质粒和菌株的保存建议 | 第36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第三章 鸭肝炎病毒VP1基因的真核表达 | 第37-58页 |
| ·试验材料 | 第37-38页 |
| ·毒株、血清 | 第37页 |
| ·载体和细胞 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·试验方法 | 第38-48页 |
| ·鸭肝炎病毒YB3和GD株VP1基因的扩增 | 第38-40页 |
| ·重组转移载体pFastBac HTA-YB3-VP1和HTA-GD-VP1构建 | 第40-42页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YB3-VP1和Bacmid-GD-VP1的构建 | 第42-44页 |
| ·重组杆状病毒的获得和扩增 | 第44-46页 |
| ·目的蛋白的表达与条件优化 | 第46-47页 |
| ·表达条件的优化 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-55页 |
| ·RT-PCR扩增目的基因 | 第48页 |
| ·重组转移载体pFastBacHTA-YB3-VP1和HTA-GD-VP1的鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-YB3-VP1和Bacmid-GD-VP1的PCR扩增鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组杆状病毒的鉴定 | 第50-52页 |
| ·表达产物的检测与鉴定 | 第52-54页 |
| ·表达条件的优化 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·关于杆状病毒表达系统的选择 | 第55-56页 |
| ·关于昆虫细胞的培养和细胞转染 | 第56页 |
| ·关于目的蛋白表达及表达条件的优化 | 第56-57页 |
| ·目的蛋白表达过程示意图 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第四章 结论与设想 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·下一步的设想 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |
