| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-16页 |
| 第一部分 Wnt1 在卵巢癌 SKOV3 细胞系干细胞中的表达及其作用机制 | 第16-33页 |
| （一） 前言 | 第16-17页 |
| （二） 材料和方法 | 第17-24页 |
| 1. 试验材料 | 第17-20页 |
| ·细胞株 | 第17页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第17-19页 |
| ·主要试剂的配置 | 第19-20页 |
| 2. 方法 | 第20-23页 |
| ·细胞培养 | 第20页 |
| ·免疫磁珠筛选 | 第20页 |
| ·细胞免疫组化 | 第20-21页 |
| ·细胞 RNA 抽提 | 第21-22页 |
| ·RT-PCR | 第22-23页 |
| ·Western blot 检测 | 第23页 |
| 3. 统计学处理 | 第23-24页 |
| （三） 结果 | 第24-25页 |
| 1. CD133+细胞分选 | 第24页 |
| ·卵巢癌悬浮细胞球形成 | 第24页 |
| ·CD133+细胞分选结果 | 第24页 |
| 2. Wnt1 及β-catenin mRNA 在各组细胞中表达情况 | 第24-25页 |
| 3. Wnt1 及β-catenin 蛋白在各组细胞中表达情况 | 第25页 |
| （四） 讨论 | 第25-28页 |
| （五） 结论 | 第28-29页 |
| （六） 参考文献 | 第29-33页 |
| 第二部分 RNAi沉默Wnt1 基因对卵巢癌SKOV3细胞影响的研究 | 第33-55页 |
| （一） 前言 | 第33-34页 |
| （二） 材料和方法 | 第34-44页 |
| 1. 实验材料 | 第34-37页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第34页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第34-35页 |
| ·主要试剂配制 | 第35-37页 |
| 2. 方法 | 第37-44页 |
| ·SKOV3 细胞培养 | 第37-38页 |
| ·shRNA 寡核苷酸的合成 | 第38页 |
| ·shRNA 寡核苷酸链的退火 | 第38-39页 |
| ·Wnt1 shRNA 载体的构建和鉴定 | 第39-41页 |
| ·转染和筛选 | 第41-42页 |
| ·实时荧光定量 RT-PCR | 第42页 |
| ·Western blot 分析 | 第42-44页 |
| 3. 统计学处理 | 第44页 |
| （三） 结果 | 第44-46页 |
| 1. shRNA 的质量检测 | 第44页 |
| 2. Wnt1 shRNA 真核表达载体的构建及测序鉴定 | 第44-45页 |
| 3． Wnt1 shRNA 对 SKOV3 细胞中 Wnt1 mRNA 表达的抑制作用 | 第45-46页 |
| 4. Western blot 法检测转染后 Wnt1 蛋白的表达 | 第46页 |
| （四） 讨论 | 第46-50页 |
| （五） 结论 | 第50-51页 |
| （六） 参考文献 | 第51-55页 |
| 第三部分 Wnt1 siRNA 抑制卵巢癌 SKOV3 细胞系干细胞增殖机制的研究 | 第55-72页 |
| （一） 前言 | 第55-56页 |
| （二） 材料和方法 | 第56-59页 |
| 1. 主要材料 | 第56页 |
| 2. 方法 | 第56-59页 |
| ·单克隆增殖实验和 CCK8 法检测对细胞增殖能力的影响 | 第56-57页 |
| ·流式细胞技术检测对细胞周期的影响 | 第57页 |
| ·流式细胞技术检测对细胞凋亡的影响 | 第57页 |
| ·流式细胞仪检测 CD133+细胞比例 | 第57页 |
| ·蛋白提取及定量 | 第57-58页 |
| ·Western blot 步骤 | 第58-59页 |
| 3. 统计学处理 | 第59页 |
| （三） 结果 | 第59-63页 |
| （四） 讨论 | 第63-67页 |
| （五） 结论 | 第67-68页 |
| （六） 参考文献 | 第68-72页 |
| 综述 | 第72-91页 |
| 参考文献 | 第80-91页 |
| 英文缩写 | 第91-92页 |
| 就读期间发表论文 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
