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玉米促分裂原活化蛋白激酶ZmMPK5基因的分离及功能分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 前言第14-25页
   ·植物细胞信号转导第14页
   ·植物 MAPK 级联途径第14-17页
     ·植物中的 MAPKKK第15-16页
     ·植物中的 MAPKK第16页
     ·植物中的 MAPK第16-17页
   ·植物 MAPK 级联途径的功能第17-24页
     ·MAPK 级联途径参与调控生物胁迫响应第17-18页
     ·MAPK 级联途径参与调控非生物胁迫响应第18页
     ·MAPK 级联途径与 ROS第18-19页
     ·MAPK 级联途径参与调控植物激素信号转导第19-22页
       ·MAPK 级联途径与生长素信号传导第19-20页
       ·MAPK 级联途径与 ABA 信号传导第20页
       ·MAPK 级联途径与乙烯信号传导第20-21页
       ·MAPK 级联途径与茉莉酸信号传导第21页
       ·MAPK 级联途径与水杨酸信号传导第21-22页
     ·MAPK 级联途径参与生长发育调控第22-24页
       ·MAPK 级联途径参与调控气孔发育第22页
       ·MAPK 级联途径参与调控胞质分裂第22-23页
       ·MAPK 级联途径参与调控植物衰老第23页
       ·MAPK 级联途径参与调控根的发育第23页
       ·MAPK 级联途径参与调控花粉囊的形成、开花和胚胎发育第23-24页
   ·本研究的目的及意义第24-25页
2 材料与方法第25-48页
   ·实验材料第25-32页
     ·植物材料第25页
     ·植物材料培养与处理第25-26页
     ·菌株与质粒第26页
     ·PCR 引物第26-28页
     ·酶与各种生化试剂第28页
     ·培养基第28-32页
   ·实验方法第32-48页
     ·植物材料总 RNA 的提取第32-33页
     ·反转录 cDNA 第一链的合成第33页
     ·ZmMPK5 基因的克隆第33页
     ·琼脂糖凝胶回收第33-34页
     ·连接反应第34页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第34-35页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第34-35页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化第35页
     ·DNA 序列测定第35页
     ·大肠杆菌中质粒 DNA 的提取第35-36页
     ·植物基因组 DNA 提取第36页
     ·荧光定量 PCR第36页
     ·洋葱表皮亚细胞定位第36-40页
       ·pBI121-ZmMPK5-GFP 表达载体的构建第36-37页
       ·pBI121-ZmMPK5-GFP 质粒的提取(碱法)第37-38页
       ·pBI121-ZmMPK5-GFP 质粒的纯化第38-39页
       ·基因枪轰击洋葱表皮观察 pBI121-ZmMPK5-GFP 重组蛋白亚细胞定位第39-40页
     ·根癌农杆菌介导的转化第40-42页
       ·表达载体的构建第40-41页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第41页
       ·冻融法转化农杆菌第41-42页
     ·农杆菌介导的烟草转化第42页
     ·转基因烟草植株鉴定第42页
       ·基因组水平的鉴定第42页
       ·转录水平的鉴定第42页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化第42-43页
       ·拟南芥转化第42-43页
       ·转基因拟南芥鉴定第43页
     ·转基因烟草植株生理指标测定第43-47页
       ·烟草种子萌发及幼苗生长实验第43-44页
       ·拟南芥种子萌发及幼苗生长实验第44页
       ·H_2O_2含量测定第44页
       ·DAB 和 NBT 染色第44页
       ·抗氧化酶活性测定第44-45页
       ·游离脯氨酸含量测定第45-46页
       ·可溶性糖含量测定第46页
       ·叶绿素含量测定第46页
       ·MDA 含量测定第46页
       ·相对电导率的测定第46-47页
       ·PVX 病原菌的侵染第47页
       ·拟南芥植株叶片气孔孔径的观察与测定第47页
       ·干旱胁迫处理及失水率测定第47页
     ·统计分析第47-48页
3 结果与分析第48-69页
   ·玉米促分裂原活化蛋白激酶 ZmMPK5 基因的分离第48页
   ·ZmMPK5 基因的序列分析第48-49页
   ·ZmMPK5 的亚细胞定位第49-50页
   ·ZmMPK5 在玉米中的表达分析第50-53页
     ·ZmMPK5 在玉米不同部位的表达分析第50-51页
     ·ZmMPK5 在各种胁迫和不同信号分子处理下的表达分析第51-52页
     ·H_2O_2影响 NaCl 和 ABA 诱导的 ZmMPK5 的表达第52-53页
   ·ZmMPK5 基因在烟草和拟南芥中的转化第53-55页
     ·转基因表达载体的构建第53页
     ·转基因烟草的鉴定第53-54页
     ·转基因拟南芥的鉴定第54-55页
   ·过表达 ZmMPK5 增强转基因烟草植株对盐胁迫的抗性第55-60页
     ·过表达 ZmMPK5 增强转基因烟草在盐胁迫条件下种子萌发及幼苗生长第55-56页
     ·过表达 ZmMPK5 的烟草调控盐胁迫条件下 ROS 的积累第56-57页
     ·过表达 ZmMPK5 提高了盐胁迫下转基因烟草中脯氨酸和可溶性糖的含量第57-58页
     ·过表达 ZmMPK5 降低了盐胁迫下转基因烟草的相对电导率及 MDA 的含量第58页
     ·过表达 ZmMPK5 提高了盐胁迫下转基因烟草抗氧化酶的活性第58-59页
     ·过表达 ZmMPK5 的转基因烟草提高了盐胁迫诱导的相关基因的表达量第59-60页
   ·过表达 ZmMPK5 增强转基因烟草的抗氧化能力第60-62页
   ·过表达 ZmMPK5 增强转基因烟草的抗病能力第62-63页
   ·ZmMPK5 参与 ABA 信号转导第63-68页
     ·过表达 ZmMPK5 转基因拟南芥参与 ABA 介导的种子萌发及幼苗生长第63-65页
     ·过表达 ZmMPK5 的转基因拟南芥增强 ABA 诱导的气孔关闭第65页
     ·过表达 ZmMPK5 的转基因拟南芥调控 ABA 响应基因的表达第65-66页
     ·过表达 ZmMPK5 的转基因拟南芥影响 ROS 的动态平衡第66-68页
   ·过表达 ZmMPK5 增强转基因拟南芥的抗旱能力第68-69页
4 讨论第69-77页
5 结论第77-78页
参考文献第78-99页
致谢第99-100页
攻读学位期间发表论文情况第100页

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