费氏中华根瘤菌WGF03中TsT和SiR基因的功能鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-29页 |
| ·生物固氮 | 第12-13页 |
| ·根瘤菌与豆科植物的共生关系 | 第13-22页 |
| ·根瘤菌的形态、生理、营养和生态 | 第14-15页 |
| ·大豆根瘤菌的有效性 | 第15-16页 |
| ·根瘤菌的结瘤过程 | 第16-17页 |
| ·结瘤基因及其表达调控 | 第17-19页 |
| ·根瘤的形成过程 | 第19-22页 |
| ·硫代谢 | 第22-26页 |
| ·微生物无机硫的代谢 | 第22-25页 |
| ·根瘤菌的硫代谢 | 第25-26页 |
| ·国内外根瘤菌的研究进展 | 第26-28页 |
| ·国外根瘤菌的研究进展 | 第26-27页 |
| ·国内根瘤菌和生物固氮的研究进展 | 第27页 |
| ·生物固氮研究展望 | 第27-28页 |
| ·研究课题的目的 | 第28-29页 |
| 第二章 材料和方法 | 第29-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第29-30页 |
| ·培养基、抗生素与菌株生长条件 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌(E.coli)使用的培养基 | 第30-31页 |
| ·根瘤菌(S.fredii)使用的培养基 | 第31-32页 |
| ·抗生素 | 第32页 |
| ·菌株的生长和保存条件 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·酶和试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·DNA分子操作技术 | 第33-37页 |
| ·根瘤菌(S.fredii)总DNA的提取 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| ·DNA片段的分离与回收 | 第35页 |
| ·DNA片段的纯化 | 第35-36页 |
| ·DNA的酶切 | 第36页 |
| ·DNA的连接 | 第36-37页 |
| ·PCR(聚合酶链式反应)扩增DNA | 第37-38页 |
| ·引物的设计 | 第37页 |
| ·模板制备 | 第37页 |
| ·PCR反应体系 | 第37-38页 |
| ·PCR反应程序 | 第38页 |
| ·转化 | 第38-39页 |
| ·化学法制备感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·连接产物的转化 | 第39页 |
| ·三亲本接合 | 第39-40页 |
| ·缺失突变株的构建原理 | 第40-41页 |
| ·功能互补菌株的构建过程 | 第41-42页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第42-43页 |
| ·根瘤菌生长曲线的测定 | 第43页 |
| ·在TY培养基和YMB培养基中生长曲线的测定 | 第43页 |
| ·MM液体培养基中的生长曲线的测定 | 第43页 |
| ·大豆植株实验 | 第43-46页 |
| 第三章 TsT基因缺失研究的结果与分析 | 第46-61页 |
| ·野生型菌株总DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·PCR扩增旁侧序列片段 | 第47-48页 |
| ·突变体TsTI的构建 | 第48-49页 |
| ·缺失突变体的互补 | 第49-50页 |
| ·互补片段的扩增 | 第49页 |
| ·互补菌株的筛选和验证 | 第49-50页 |
| ·TsT基因测序结果生物信息学分析 | 第50-51页 |
| ·TsT基因的缺失突变菌株及互补菌株的功能验证 | 第51-55页 |
| ·突变菌株TsTI在TY培养基上的生长情况 | 第51-53页 |
| ·突变菌株TsTI在YMA培养基上的生长情况 | 第53-54页 |
| ·胞外多糖检测 | 第54-55页 |
| ·硫源的利用情况 | 第55-58页 |
| ·植株实验 | 第58-61页 |
| ·植株的结瘤时间检测 | 第58-59页 |
| ·竞争结瘤的检测 | 第59-60页 |
| ·共生结瘤固氮效应检测 | 第60-61页 |
| 第四章 SiR基因缺失研究的结果与分析 | 第61-77页 |
| ·野生型菌株总DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·PCR扩增旁侧序列片段 | 第62-63页 |
| ·突变体SiRI的构建 | 第63-64页 |
| ·缺失突变体的互补 | 第64-66页 |
| ·互补片段的扩增 | 第64-65页 |
| ·互补菌株的筛选和验证 | 第65-66页 |
| ·SiR基因测序结果生物信息学分析 | 第66-67页 |
| ·SiR基因的缺失突变菌株及互补菌株的功能验证 | 第67-70页 |
| ·突变菌株SiRI在TY培养基上的生长情况 | 第67-68页 |
| ·突变菌株SiRI在YMA培养基上的生长情况 | 第68-70页 |
| ·胞外多糖检测 | 第70页 |
| ·硫源的利用情况 | 第70-74页 |
| ·植株实验 | 第74-77页 |
| ·植株的结瘤时间检测 | 第74-75页 |
| ·竞争结瘤的检测 | 第75-76页 |
| ·共生结瘤固氮效应检测 | 第76-77页 |
| 第五章 总结与讨论 | 第77-81页 |
| ·总结 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·本工作的有待深入的内容 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第94页 |
