| 摘要 | 第1-8页 |
| 文献综述 | 第8-15页 |
| 1 Musclin基因的研究进展 | 第8-13页 |
| ·Musclin基因的发现 | 第8页 |
| ·Musclin基因的结构及分布 | 第8-10页 |
| ·Musclin基因的表达调控 | 第10-12页 |
| ·Musclin基因的生物学作用 | 第12-13页 |
| ·Musclin(即Osteocrin)在骨骼中的研究 | 第13页 |
| 2 本研究的立项依据和研究意义 | 第13-15页 |
| 试验一 绵羊Musclin基因5'调控区的克隆及pMUSCLINpro-EGFP表达载体的构建 | 第15-38页 |
| ·材料与方法 | 第15-25页 |
| ·动物材料、菌株和质粒载体 | 第15页 |
| ·分子试验生化试剂 | 第15页 |
| ·引物设计及序列分析软件 | 第15-16页 |
| ·仪器与设备 | 第16页 |
| ·常用试剂与缓冲液的配制 | 第16-17页 |
| ·基本实验方法 | 第17-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-34页 |
| ·绵羊Musclin基因1.4kb 5'调控区的克隆 | 第25-27页 |
| ·绵羊等动物Musclin基因5'调控区序列的同源性分析 | 第27-29页 |
| ·绵羊Musclin基因5'调控区调控元件的鉴定及其在物种间的比较 | 第29-33页 |
| ·不同长度绵羊pMUSCLINpro-EGFP表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-38页 |
| ·关于PCR反应 | 第34页 |
| ·报告基因的选择 | 第34-35页 |
| ·Musclin基因5'调控区一些重要元件的作用 | 第35-36页 |
| ·不同物种间Musclin基因5'调控区序列及其元件的保守性和变异性 | 第36-38页 |
| 试验二 C2C12细胞中Musclin基因的转录调控研究 | 第38-50页 |
| ·材料与方法 | 第38-43页 |
| ·动物细胞和质粒 | 第38页 |
| ·分子试验生化试剂 | 第38页 |
| ·引物设计和序列分析软件 | 第38页 |
| ·仪器与设备 | 第38页 |
| ·常用试剂与缓冲液的配制 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-48页 |
| ·小鼠C2C12成肌细胞的生长特性 | 第43页 |
| ·绵羊Musclin启动子(1.4kb)在小鼠C2C12成肌细胞中的活性 | 第43-45页 |
| ·不同转染组C2C12细胞的RNA提取结果 | 第45-46页 |
| ·GAPDH以及EGFP基因扩增曲线和融解曲线分析 | 第46-47页 |
| ·不同转染组C2C12细胞EGFP基因mRNA表达的差异 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| ·关于细胞总RNA的提取和荧光定量PCR方法条件的优化 | 第48页 |
| ·关于不同长度Musclin基因5’调控区的转录调控活性 | 第48-50页 |
| 试验三 利用EMSA鉴定调控元件GA-box和MEF2-box | 第50-57页 |
| ·材料与方法 | 第50-54页 |
| ·动物材料 | 第50页 |
| ·相关试剂 | 第50页 |
| ·仪器与设备 | 第50页 |
| ·探针分析及设计 | 第50-51页 |
| ·基本实验方法 | 第51-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-55页 |
| ·调控元件MEF2-box和GA-box的EMSA鉴定 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·关于组织核蛋白的提取 | 第55-56页 |
| ·关于转录因子与调控元件共同调控转录的机制 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| Abstract | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
