| 摘要 | 第1-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-16页 |
| ·制备转基因鸡的技术方法 | 第9-13页 |
| ·基因显微注射法 | 第9-10页 |
| ·鸡卵原始胚细胞的弹道转染 | 第10页 |
| ·反转录病毒载体法 | 第10-11页 |
| ·胚胎干细胞原生殖细胞操作法 | 第11页 |
| ·精子载体法 | 第11-13页 |
| ·慢病毒载体 | 第13-14页 |
| ·慢病毒载体制备转基因动物的进展 | 第13-14页 |
| ·慢病毒载体精子介导法生产转基因动物的研究进展 | 第14页 |
| ·报告基因GFP | 第14页 |
| ·本研究的目的、意义和主要内容 | 第14-15页 |
| ·本研究的技术路线 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-41页 |
| ·实验材料 | 第16-20页 |
| ·实验用鸡 | 第16页 |
| ·实验仪器设备 | 第16-17页 |
| ·主要药品、试剂及酶 | 第17页 |
| ·常用溶液及试剂的配制 | 第17-19页 |
| ·引物设计及分析软件 | 第19页 |
| ·病毒、细胞系及质粒载体 | 第19页 |
| ·原代细胞培养试剂及配置 | 第19-20页 |
| ·组织切片器材及试剂 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第20-21页 |
| ·对照质粒真核表达载体PcDNA3.1-GFP的构建 | 第21-23页 |
| ·质粒转化提取 | 第23-25页 |
| ·293T细胞的培养 | 第25-26页 |
| ·以GFP为报告基因的慢病毒的生产 | 第26-27页 |
| ·慢病毒滴度检测 | 第27-28页 |
| ·真核表达载体PcDNA3.1-GFP转染293T细胞 | 第28页 |
| ·鸡胚生殖细胞的分离、培养及感染慢病毒实验 | 第28-30页 |
| ·鸡胚小肠上皮细胞原代培养及感染慢病毒实验 | 第30-32页 |
| ·慢病毒感染细胞目的基因检测 | 第32-36页 |
| ·公鸡生殖器官组织切片 | 第36-38页 |
| ·微创法慢病毒载体连续导入性成熟公鸡睾丸 | 第38-39页 |
| ·手术后定期采精观察检测及人工授精 | 第39-40页 |
| ·授精蛋孵化及第一代转基因鸡检测 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-52页 |
| ·重组真核表达载体pcDNA3.1-GFP的鉴定 | 第41-42页 |
| ·PCR技术扩增pGFP质粒中的GFP基因片段 | 第41页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-GFP酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1-GFP在293T细胞表达 | 第42页 |
| ·慢病毒包装结果 | 第42-45页 |
| ·慢病毒感染和真核表达载体转染293T细胞表型的变化 | 第42-43页 |
| ·慢病毒在不同细胞中的表达结果 | 第43-45页 |
| ·鸡胚生殖细胞原代培养及慢病毒转染结果 | 第45-48页 |
| ·不同时期鸡胚生殖细胞在不同消化体系中的分离效果分析 | 第46页 |
| ·鸡胚生殖细胞形态特征 | 第46-47页 |
| ·慢病毒感染鸡胚生殖细胞结果 | 第47-48页 |
| ·鸡胚小肠上皮细胞原代培养及慢病毒转染结果 | 第48-50页 |
| ·鸡胚小肠上皮细胞原代培养生长形态观察 | 第48-49页 |
| ·鸡胚小肠上皮细胞生长曲线 | 第49页 |
| ·慢病毒转染鸡胚小肠上皮细胞结果 | 第49-50页 |
| ·公鸡生殖器官组织切片结果 | 第50-51页 |
| ·微创手术睾丸内导入慢病毒载体结果 | 第51-52页 |
| 第四章 分析与讨论 | 第52-63页 |
| ·影响真核表达载体pcDNA3.1-GFP构建的因素 | 第52页 |
| ·感受态细胞对转化以及内毒素对转染的影响 | 第52-53页 |
| ·293T细胞培养的相关因素 | 第53-54页 |
| ·细胞及脂质体对慢病毒包装的影响 | 第54-55页 |
| ·影响慢病毒载体包装和表达效率的因素 | 第55页 |
| ·影响原代鸡胚生殖细胞培养的因素 | 第55-57页 |
| ·不同时期鸡胚生殖细胞在不同消化体系下分离效果的比较 | 第55-56页 |
| ·支持细胞作为生殖细胞饲养层的依据 | 第56页 |
| ·体外培养生殖细胞时间短的原因 | 第56-57页 |
| ·影响原代培养鸡胚小肠上皮细胞的因素 | 第57-58页 |
| ·消化酶及消化时间 | 第57页 |
| ·鸡胚小肠上皮细胞生长的主要影响因素 | 第57-58页 |
| ·慢病毒感染原代培养细胞影响因素 | 第58-59页 |
| ·公鸡生殖器官组织切片的影响因素及意义 | 第59页 |
| ·微创手术公鸡睾丸内导入慢病毒载体手术的影响因素 | 第59-60页 |
| ·影响真核表达载体PCDNA3.1-GFP表达效率的因素 | 第60-61页 |
| ·全文讨论分析 | 第61-63页 |
| 第五章 结论 | 第63-64页 |
| 考参文献 | 第64-69页 |
| ABSTRACT | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
