| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号和縮略语说明 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-33页 |
| 一 3,5,6-三氯-2-吡啶醇(TCP)环境污染及微生物降解TCP研究进展 | 第15-23页 |
| 1 TCP污染来源及环境危害 | 第15-18页 |
| ·TCP污染来源 | 第15-17页 |
| ·TCP环境危害 | 第17-18页 |
| 2 TCP微生物降解 | 第18-23页 |
| ·TCP微生物降解资源 | 第18-19页 |
| ·微生物降解有机污染物机理 | 第19-20页 |
| ·微生物降解影响因子 | 第20-21页 |
| ·微生物降解TCP基因及代谢途径研究概况 | 第21-23页 |
| 二 氯代有机污染物微生物脱氯机制研究进展 | 第23-28页 |
| 1 水解脱氯 | 第23-24页 |
| 2 氧化脱氯 | 第24-25页 |
| 3 还原脱氯(严格厌氧) | 第25-26页 |
| 4 巯基取代还原脱氯(有氧条件) | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第二章 3,5,6-三氯-2-吡啶醇降解菌Ralstonia sp.strain T6的分离与鉴定、降解特性研究及降解中间体鉴定 | 第33-63页 |
| 第一节 3,5,6-三氯-2-吡啶醇(TCP)降解菌Ralstonia sp.strain T6的分离和鉴定 | 第34-42页 |
| 1 材料与方法 | 第34-38页 |
| ·培养基和试剂 | 第34-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第35页 |
| ·TCP降解菌株的富集培养和筛选 | 第35-36页 |
| ·降解菌株的菌落特征和生理生化鉴定 | 第36页 |
| ·降解菌株16S rRNA基因序列分析 | 第36-37页 |
| ·TCP检测方法——紫外扫描法 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| ·TCP降解菌的分离和菌落形态观察 | 第38-39页 |
| ·生理生化特性 | 第39-40页 |
| ·降解菌株16S rRNA基因序列分析 | 第40-42页 |
| 第二节 3,5,6-三氯-2-吡啶醇(TCP)降解菌Ralstonia sp.strain T6降解特性的研究及降解中间体鉴定 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第42-45页 |
| ·培养基和试剂 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·TCP浓度标准曲线的绘制 | 第42-43页 |
| ·降解实验所用种子液的准备 | 第43页 |
| ·Ralstonia sp.strain T6对TCP降解特性研究 | 第43-44页 |
| ·TCP降解过程中绿色中间体的变化曲线 | 第44页 |
| ·绿色中间体的鉴定 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-56页 |
| ·TCP浓度标准曲线的绘制 | 第45-46页 |
| ·TCP降解曲线和降解过程中的生长曲线 | 第46页 |
| ·接种量对TCP降解的影响 | 第46-48页 |
| ·TCP初始浓度对降解的影响 | 第48-49页 |
| ·温度和pH对TCP降解的影响 | 第49-50页 |
| ·金属离子对TCP降解的影响 | 第50-51页 |
| ·TCP降解过程中绿色中间体的变化曲线 | 第51-53页 |
| ·绿色中间体的鉴定 | 第53-56页 |
| 讨论 | 第56-58页 |
| 本章小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 第三章 Ralstonia sp.strain T6中3,5,6-三氯-2-吡啶醇降解基因簇的克隆及序列分析 | 第63-87页 |
| 1 材料与方法 | 第63-76页 |
| ·菌株与质粒 | 第63页 |
| ·培养基与试剂 | 第63-64页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第64页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第64-65页 |
| ·基因组DNA提取 | 第65-66页 |
| ·Ralstonia sp.strain T6中单加氧酶基因tcpA的扩增和同源重组单交换插入失活 | 第66-68页 |
| ·针对Ralstonia sp.strain T6进行的随机插入突变子文库构建 | 第68-69页 |
| ·侧翼序列的克隆 | 第69-74页 |
| ·PCR产物回收及T-A克隆 | 第74-75页 |
| ·普通感受态细胞的制备 | 第75页 |
| ·高效感受态细胞的制备 | 第75-76页 |
| ·酶连产物的转化 | 第76页 |
| ·序列分析软件、在线分析网址 | 第76页 |
| 2 结果与分析 | 第76-82页 |
| ·Ralstonia sp.strain T6中单加氧酶基因tcpA的同源重组单交换插入失活 | 第76-77页 |
| ·Ralstonia sp.strain T6的随机插入突变子文库构建 | 第77-78页 |
| ·侧翼序列克隆 | 第78-80页 |
| ·侧翼序列分析 | 第80-82页 |
| 3 讨论 | 第82-83页 |
| 4 本章小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 第四章 Ralstonia sp.strain T6中TCP降解基因簇关键基因的功能验证 | 第87-107页 |
| 1 材料与方法 | 第87-95页 |
| ·菌株、质粒和引物 | 第87-88页 |
| ·培养基与试剂 | 第88页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第88-89页 |
| ·tcpA功能互补载体构建 | 第89-90页 |
| ·tcpA功能互补实验 | 第90-91页 |
| ·thpI和thpJ基因表达载体及菌株的构建 | 第91-92页 |
| ·ThpI和ThpJ的诱导表达及功能检测 | 第92-93页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第93-94页 |
| ·蛋白含量检测 | 第94页 |
| ·PCR产物加A尾 | 第94页 |
| ·PCR产物回收及T-A克隆 | 第94页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第94-95页 |
| ·酶连产物的转化 | 第95页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第95页 |
| ·降解中间体Met_(332)的鉴定 | 第95页 |
| 2 结果和分析 | 第95-104页 |
| ·tcpA功能互补 | 第95-97页 |
| ·ThpI和ThpJ的诱导表达及功能检测 | 第97-103页 |
| ·菌株T6降解TCP的代谢途径推测 | 第103-104页 |
| 3 讨论 | 第104-105页 |
| 4 本章小结 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-107页 |
| 全文总结 | 第107-109页 |
| 本文主要创新之处 | 第109-111页 |
| 附录一 文中所用的试剂、培养基及相关缓冲体系配方 | 第111-113页 |
| 附录二 相关基因序列 | 第113-121页 |
| 博士在读期间发表论文 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
