| 缩写词 | 第1-12页 |
| 摘要 | 第12-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 第一章 引言 | 第21-34页 |
| 1 植物 miRNA 研究进展 | 第22-28页 |
| ·植物 miRNA 的发现 | 第22-23页 |
| ·直接克隆法 | 第22-23页 |
| ·反向遗传学分析方法 | 第23页 |
| ·生物信息学预测 | 第23页 |
| ·植物 miRNA 的生物合成 | 第23-25页 |
| ·植物 miRNA 的前体转录 | 第23-24页 |
| ·植物 miRNA 转录后的加工运输 | 第24页 |
| ·植物 miRNA 的成熟及 miRNA 组装 | 第24-25页 |
| ·植物 miRNA 的作用机制 | 第25-27页 |
| ·靶基因 mRNA 的剪切 | 第25-26页 |
| ·靶基因 mRNA 的翻译抑制 | 第26页 |
| ·靶基因转录水平沉默调控 | 第26-27页 |
| ·miRNA 靶基因的预测与鉴定 | 第27页 |
| ·植物 miRNA 对靶基因的调控 | 第27-28页 |
| ·植物 miRNA 的特征 | 第28页 |
| 2 植物体胚发生过程中 miRNA 研究进展 | 第28-30页 |
| ·植物体胚发生过程中成熟 miR156、miR166、miR397 研究进展 | 第29-30页 |
| ·植物 miR156、miR166、miR397 对植物生长发育调控机制研究 | 第29页 |
| ·植物 miR156、miR166、miR397 对环境胁迫的应答机制研究 | 第29-30页 |
| 3 龙眼体胚发生过程中 miR156、miR166、miR397 研究进展 | 第30页 |
| 4 植物 miR397a 研究进展 | 第30-32页 |
| ·植物 miR397a 的保守性 | 第30-31页 |
| ·植物 miR397 靶基因的研究 | 第31-32页 |
| ·植物 miR397 功能研究 | 第32页 |
| 5 本研究的内容及意义 | 第32-34页 |
| ·本试验研究的意义 | 第32-33页 |
| ·本试验研究的内容 | 第33-34页 |
| 第二章 龙眼胚性愈伤组织 miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 初级体克隆及生 物信息学分析 | 第34-55页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166、pri-miR397 克隆 | 第34-42页 |
| 1 材料与方法 | 第34-36页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织总 DNA 的提取和浓度检测 | 第34-35页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 引物设计 | 第35页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a PCR 扩增反应条件及程序 | 第35-36页 |
| ·目的片段的回收、克隆和测序 | 第36页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri -miR156a-1、pri -miR156a-2、pri- miR166a、pri- miR397a 生物信息学分析 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-41页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织总 DNA 的提取与质量检测 | 第36-37页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397 的 PCR 扩增及测序 | 第37-41页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1 克隆 | 第37-38页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-2 的克隆 | 第38-39页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR166a 的克隆 | 第39-40页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR397a 的克隆 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-42页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 初级体序列克隆的 关键因素及意义 | 第41-42页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 初级体高度同源性 | 第42页 |
| 第二节 龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 生物信息学分析 | 第42-55页 |
| 1 材料与方法 | 第42-43页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·方法 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-53页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 二级结构及成熟序列预测与分析 | 第43-50页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2 二级结构及成熟序列预测 与分析 | 第43-46页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR166a 二级结构及成熟序列预测与分析 | 第46-48页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR397a 二级结构及成熟序列预测与分析 | 第48-50页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a、miR166a、miR397a 靶基因预测 | 第50-51页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 同 源性分析 | 第51-53页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1 同源性分析 | 第51页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-2 同源性分析 | 第51-52页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR166a 同源性分析 | 第52页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR397a 同源性分析 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-55页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 的确定 | 第53页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 的保守性 | 第53-55页 |
| 第三章 龙眼胚性愈伤组织靶基因的克隆及生物信息学分析 | 第55-80页 |
| 第一节 龙眼胚性愈伤组织靶基因的克隆 | 第55-69页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·材料 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织总 RNA 的提取和质量检测 | 第55-56页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 laccase、β-tubulin 基因克隆 | 第56-57页 |
| ·序列拼接 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-67页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织总 RNA 提取与质量检测 | 第57页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 laccase、β-tubulin6 基因保守区的克隆 | 第57-60页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 laccase、β-tubulin6 基因 cDNA 序列的 3′RACE 克隆结果 | 第60-62页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因的全长拼接 | 第62-63页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3、β-tubulin6 基因 ORF 扩增结果 | 第63-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| ·龙眼 laccase、β-tubulin3、β-tubulin6 基因序列获得 | 第67页 |
| ·龙眼 laccase、β-tubulin3、β-tubulin6 基因克隆的意义 | 第67-68页 |
| ·龙眼 laccase、β-tubulin6、β-tubulin3 基因具有高度同源性 | 第68-69页 |
| 第二节 龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 基因的生物信息学分析 | 第69-80页 |
| 1 材料与方法 | 第69页 |
| ·材料 | 第69页 |
| ·方法 | 第69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-78页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 编码蛋白理化性质预测与分析 | 第69-71页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 基因编码蛋白二级结构及三维结构的预测 | 第71-72页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 蛋白亚细胞定位和信号肽预测 | 第72-73页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 编码蛋白保守结构域预测与分析 | 第73页 |
| ·龙眼 β-tubulin3、β-tubulin6 蛋白磷酸化位点预测与分析 | 第73-74页 |
| ·龙眼 β-tubulin3、β-tubulin6 蛋白的功能位点预测与分析 | 第74页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6同源性分析与系统发育树的建立 | 第74-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| ·龙眼β-tubulin3、β-tubulin6 基因在细胞中转录后水平调控的作用机理 | 第78-79页 |
| ·龙眼微管蛋白β-tubulin3、β-tubulin6的保守性及其应用价值 | 第79-80页 |
| 第四章 外源激素和非生物胁迫下 miR156a、miR166a、miR397a 及靶基因荧光定 量 PCR 表达分析 | 第80-110页 |
| 1 材料与方法 | 第80-83页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-83页 |
| ·乙烯处理 | 第80-81页 |
| ·赤霉素（GA3）处理 | 第81页 |
| ·吲哚乙酸( IAA)处理 | 第81页 |
| ·茉莉酸甲酯（MJ）处理 | 第81页 |
| ·水杨酸（SA）处理 | 第81页 |
| ·蔗糖处理 | 第81页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 RNA 提取及质量检测 | 第81页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第81-83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-106页 |
| ·龙眼 miR156a、miR166a、miR397a、β-tubulin3、β-tubulin6 基因 qPCR 引物的特 异性和标准曲线分析 | 第83-84页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度乙烯处理下 miR156a、miR166a、miR397a 基因的 表达分析 | 第84-86页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度乙烯处理下的表达分析 | 第85页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度乙烯处理下的表达分析 | 第85-86页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 GA3 处理下 miR156a、miR166a、miR397a 基因的表达分析 | 第86-88页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度 GA3 处理下的表达分析 | 第87页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度 GA3 处理下的表达分析 | 第87-88页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度IAA处理下miR156a、miR166a、miR397a基因的表达分析 | 第88-89页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度 IAA 处理下的表达分析 | 第88-89页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度 IAA 处理下的表达分析 | 第89页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 MJ 处理下 miR156a、miR166a、miR397a 基因的表 达分析 | 第89-92页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度 MJ 处理下的表达分析 | 第90-91页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度 MJ 处理下的表达分析 | 第91-92页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 SA 处理下 miR156a、miR166a、miR397a 基因的表 达分析 | 第92-94页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度 SA 处理下的表达分析 | 第92-93页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度 SA 处理下的表达分析 | 第93-94页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度蔗糖处理下miR156a、miR156a、miR397a基因的表达分析 | 第94-95页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR156a 基因在不同浓度蔗糖处理下的表达分析 | 第94-95页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 miR397a 基因在不同浓度蔗糖处理下的表达分析 | 第95页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度乙烯处理下β-tubulin3 、β-tubulin6 基因的 表达分析 | 第95-97页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度乙烯处理下的表达分析 | 第95-96页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度乙烯处理下的表达分析 | 第96-97页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 GA3 处理下β-tubulin3 、β-tubulin6 基因的表 达分析 | 第97-99页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度 GA3 处理下的表达分析 | 第97-98页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度 GA3 处理下的表达分析 | 第98-99页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 IAA 处理下β-tubulin3 、β-tubulin6 基因的表 达分析 | 第99-101页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度 IAA 处理下的表达分析 | 第99-100页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度 IAA 处理下的表达分析 | 第100-101页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度 MJ 处理下β-tubulin3、β-tubulin6 基因的表达 分析 | 第101-102页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度 MJ 处理下的表达分析 | 第101-102页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度 MJ 处理下的表达分析 | 第102页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度水杨酸 SA 处理下β-tubulin3 、β-tubulin6 基因的 表达分析 | 第102-104页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度 SA 处理下的表达分析 | 第103页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度 SA 处理下的表达分析 | 第103-104页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织在不同浓度蔗糖处理下β-tubulin3、β-tubulin6 基因的表 达分析 | 第104-106页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin3 基因在不同浓度蔗糖处理下的表达分析 | 第105页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织β-tubulin6 基因在不同浓度蔗糖处理下的表达分析 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-110页 |
| ·外源激素及非生物胁迫下诱导 miR156 表达差异 | 第106-107页 |
| ·外源激素及非生物胁迫下诱导下 miR397 表达差异 | 第107-108页 |
| ·外源激素及非生物胁迫下诱导 β-tubulin 基因家族表达差异 | 第108-109页 |
| ·外源激素及非生物胁迫下龙眼miRNA与靶基因的互作机制 | 第109-110页 |
| 第五章 龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a、pri-miR166a、pri-miR397a 超表达研究及与 靶基因的互作机制研究 | 第110-125页 |
| 1 材料和方法 | 第110-113页 |
| ·材料 | 第110-111页 |
| ·方法 | 第111-113页 |
| ·烟草无菌苗的培养 | 第111页 |
| ·龙眼 miR156a-1、miR156a-2、miR397a 初级体及靶基因β-tubulin 载体构建 流程 | 第111-112页 |
| ·农杆菌重悬液注射烟草叶片 | 第112-113页 |
| ·注射农杆菌的烟草叶片的 RNA 提取 | 第113页 |
| ·荧光定量 RT-PCR 检测 | 第113页 |
| ·GUS 蛋白组织化学染色 | 第113页 |
| 2 结果与分析 | 第113-123页 |
| ·miRNA 与靶标植物超表达载体构建分析 | 第113-115页 |
| ·GUS 蛋白组织化学染色结果 | 第115-116页 |
| ·龙眼 miR156a、miR166a、miR397a、β-tubulin3、β-tubulin6、5.8S 标准 曲线分析 | 第116-118页 |
| ·miR156a 标准曲线分析 | 第116页 |
| ·miR166a 标准曲线分析 | 第116-117页 |
| ·miR397a 标准曲线分析 | 第117页 |
| ·β-tubulin3 标准曲线分析 | 第117页 |
| ·β-tubulin6标准曲线分析 | 第117-118页 |
| ·miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 初级体超表达研究 | 第118-120页 |
| ·35S::pri-miR156a 表达分析 | 第118-119页 |
| ·35S::pri-miR166a 表达分析 | 第119页 |
| ·35S::pri-miR397a 表达分析 | 第119-120页 |
| ·35S:: pri-miR397a 与关键靶标 35S::β-tubulin6 及非主要靶标 35S:: β-tubulin3 组合注射中miR397a的表达分析 | 第120-121页 |
| ·35S:: pri-miR397a 与非主要靶标 35S::β-tubulin3 组合注射中β-tubulin3 的 表达分析 | 第121-122页 |
| ·35S:: pri-miR397a 与关键靶标 35S::β-tubulin6 组合注射中β-tubulin6 的表 达分析 | 第122-123页 |
| 3 讨论 | 第123-125页 |
| ·龙眼 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 过量表达对 miR156a、miR166a、miR397a 水平的影响 | 第123页 |
| ·miR397a 与靶基因β-tubulin6、β-tubulin3 互作机制的研究 | 第123-125页 |
| 第六章 小结 | 第125-132页 |
| 1 龙眼胚性愈伤组织 miR156a-1、miR156a-2、miR166a、miR397a 初级体克隆及生 物信息学分析 | 第125-126页 |
| 2 龙眼胚性愈伤组织靶基因β-tubulin3、β-tubulin6、laccase 克隆及生物信 息学分析 | 第126-127页 |
| 3 外源激素和非生物胁迫下 dlo-miR156a、dlo-miR166a、dlo-miR397a 及靶基因 dl-β-tubulin 家族成员的荧光定量 PCR 表达分析 | 第127-130页 |
| ·外源激素胁迫下成熟 dlo-miR156a、dlo-miR166a、dlo-miR397a 及靶基因 dl-β-tubulin 荧光定量 PCR 表达分析 | 第127-130页 |
| ·非生物胁迫胁迫下成熟 dlo-miR156a、dlo-miR166a、dlo-miR397a 及靶基因 dl-β-tubulin 荧光定量 PCR 表达分析 | 第130页 |
| 4 龙眼胚性愈伤组织 pri-miR156a-1、pri-miR156a-2、pri-miR166a、pri-miR397a 超表达研究及其与靶基因互作机制研究 | 第130-132页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 dlo-pri-miR156a-1 、 dlo-pri-miR156a-2 、 dlo-pri-miR166a 、dlo-pri-miR397a 超表达研究 | 第130-131页 |
| ·龙眼胚性愈伤组织 dlo-miR397a 与靶基因 dl-β-tubulin 家族的互作机制研究 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-143页 |
| 附录 | 第143-153页 |
| 附录 1 图版及图版说明 | 第143-148页 |
| 附录 2 GenBank 上登录的龙眼胚性愈伤组织β-tubulin 基因两成员的 cDNA 序列 | 第148-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
