EIAV诱导的特异性T细胞免疫应答检测方法的建立
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| ·马传染性贫血病毒的研究概况 | 第12-16页 |
| ·EIAV的结构特征 | 第12-13页 |
| ·EIAV基因结构和编码蛋白 | 第13-15页 |
| ·EIAV的生活周期与致病机理 | 第15-16页 |
| ·EIAV感染及其免疫控制 | 第16-20页 |
| ·体液免疫应答在慢病毒免疫中的作用 | 第17-18页 |
| ·NK细胞在慢病毒免疫中的作用 | 第18-19页 |
| ·细胞免疫应答在慢病毒免疫中的作用 | 第19-20页 |
| ·细胞免疫检测方法 | 第20-23页 |
| ·迟发型超敏反应法(DTH) | 第20-21页 |
| ·TCR可变区分析法 | 第21页 |
| ·多肽MHC四聚体技术 | 第21页 |
| ·细胞因子ELISA方法 | 第21-22页 |
| ·细胞因子mRNA定量法 | 第22页 |
| ·ELISPOT法 | 第22-23页 |
| ·本研究背景、意义及拟解决的问题 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-33页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·实验用菌株、质粒与实验动物 | 第25页 |
| ·实验主要酶类和生化试剂 | 第25页 |
| ·实验主要仪器 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-33页 |
| ·p26原核表达载体的构建 | 第26页 |
| ·p26重组表达载体的表达及纯化 | 第26-27页 |
| ·gp45原核表达载体的构建 | 第27页 |
| ·gp45重组表达质粒的表达与纯化 | 第27页 |
| ·原核表达重组p26蛋白和gp45蛋白的鉴定分析 | 第27页 |
| ·p26多肽的设计和合成 | 第27-28页 |
| ·ELISpot检测 | 第28页 |
| ·马外周血单个核细胞(PBMC)的制备 | 第28页 |
| ·总RNA的提取 | 第28-29页 |
| ·cDNA合成 | 第29页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| ·测序与分析 | 第32-33页 |
| 3 结果和分析 | 第33-42页 |
| ·P26蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定 | 第33-34页 |
| ·gp45蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定 | 第34-35页 |
| ·ELISPOT检测IFN-γ方法的建立 | 第35-37页 |
| ·刺激物的选择 | 第35页 |
| ·刺激物浓度的确定 | 第35-36页 |
| ·刺激时间的确定 | 第36页 |
| ·EIAV免疫马的IFN-γ检测 | 第36-37页 |
| ·RT-PCR扩增马MHC-I类分子 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第38页 |
| ·序列测定及分析 | 第38-41页 |
| ·p26蛋白抗原表位的筛选 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| ·MHC非等位基因相关问题 | 第42-43页 |
| ·ELISPOT方法的建立 | 第43页 |
| ·刺激物的选择 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
