| 前言 | 第1-5页 |
| 第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第二部分 BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞的建立及体外表达 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第三部分 脱细胞异体神经和胎盘羊膜的制备 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第四部分 胎盘羊膜包裹脱细胞同种异体神经复合BDNF和CNTF转染BMSCs纤维蛋白胶桥接的实验研究 | 第8-17页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 大鼠BMSCs的分离培养和鉴定 | 第19-35页 |
| 1、材料与方法 | 第19-21页 |
| ·实验试剂 | 第19-21页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2. 实验动物 | 第21页 |
| 3. 实验方法 | 第21-27页 |
| ·大鼠BMSCs的制备 | 第21-22页 |
| ·MSCs的培养 | 第22页 |
| ·BMSCs的培养和传代扩增 | 第22页 |
| ·大鼠BMSCs一般生物学特性的观察 | 第22-24页 |
| ·细胞形态学观察 | 第22-23页 |
| ·大鼠BMSCs的流式细胞仪测定 | 第23页 |
| ·BMSCs制备生物蛋白胶复合物,观察其生物活性 | 第23-24页 |
| ·细胞形态学观察 | 第24-25页 |
| ·流式细胞仪测定 | 第25-26页 |
| ·观察BMSCs生物蛋白胶复合物的生物活性 | 第26-27页 |
| 4. 讨论 | 第27-30页 |
| 小结 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二部分 BDNF和CNTF表达载体构建及在骨髓间充质干细胞中的表达 | 第35-73页 |
| 1 | 第35-41页 |
| ·真核表达载体PIRES | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·引物 | 第36-37页 |
| ·BDNFcDNA码区全长扩增弓I物 | 第36页 |
| ·CNTFcDNA码区全长扩增引物 | 第36-37页 |
| ·BDNF基因表达检测引物 | 第37页 |
| ·CNTF基因表达检测引物 | 第37页 |
| ·内参标GAPDH引物 | 第37页 |
| ·cDNA 克隆 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-39页 |
| ·主要试剂的配制 | 第39-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 2 实验方法 | 第41-49页 |
| ·重组表达载体pIRES-BDNF的构建 | 第41-45页 |
| ·BDNF目的基因制备 | 第41页 |
| ·目的基因BDNF扩增产物和表达载体pIRES的酶切和纯化 | 第41-42页 |
| ·目的基因BDNF与pIRES连接及转化 | 第42-44页 |
| ·重组子的PCR和酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·测定和分析DNA序列 | 第45页 |
| ·重组表达载体pIRES-CNTF的构建 | 第45-47页 |
| ·CNTF目的基因制备 | 第45页 |
| ·目的基因CNTF扩增产物和表达载体pIRES的酶切和纯化 | 第45-46页 |
| ·目的基因CNTF与pIRES连接及转化 | 第46页 |
| ·重组子的PCR和酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·测定和分析DNA序列 | 第47页 |
| ·重组双基因表达载体pIRES-BDNF-CNTF的构建 | 第47-49页 |
| ·pIRES-BDNF双黏(XbaI和SalI)线性载体的制备 | 第47-48页 |
| ·pIRES-BDNF与目的基因CNTF连接及转化 | 第48页 |
| ·双基因重组子的PCR和酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3. 实验结果 | 第49-63页 |
| ·目的基因BDNF、CNTF扩增结果 | 第49-50页 |
| ·重载体pIRES-BDNF、pIRES-CNTF的鉴定结果 | 第50-57页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·酶切鉴定结果 | 第51页 |
| ·DNA序列测定及分析结果 | 第51-57页 |
| ·重组双基因表达载体pIRES-BDNF-CNTF的构建结果 | 第57-58页 |
| ·细胞转染 | 第58-60页 |
| ·细胞准备 | 第58-59页 |
| ·重组表达载体DNA的制备 | 第59页 |
| ·细胞分组 | 第59页 |
| ·电转 | 第59-60页 |
| ·蹄选培养 | 第60页 |
| ·RT-PCR检测BDNF mRNA、CNTF mRNA表达情况 | 第60-61页 |
| ·免疫印迹检测BDNF和CNTF蛋白表达 | 第61-63页 |
| ·样品的制备 | 第61页 |
| ·蛋白样品浓度的测定 | 第61-62页 |
| ·电泳 | 第62页 |
| ·转膜 | 第62-63页 |
| ·免疫杂交与显色 | 第63页 |
| ·统计学分析 | 第63页 |
| 4 结果 | 第63-67页 |
| ·细胞转染结果 | 第63-64页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第64-66页 |
| ·免疫印迹检测结果 | 第66-67页 |
| 5. 讨论 | 第67-69页 |
| 小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-73页 |
| 第三部分 脱细胞同种异体神经和胎盘羊膜的制备 | 第73-82页 |
| 1 材料与方法 | 第73-74页 |
| ·实验动物 | 第73页 |
| ·主要药品和试剂 | 第73-74页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| 2. 制备脱细胞异体神经 | 第74-77页 |
| ·对化学脱细胞同种异体神经进行检测 | 第75-77页 |
| ·比较外形 | 第75页 |
| ·比较重量 | 第75页 |
| ·形态学的比较 | 第75-77页 |
| 3. 胎盘羊膜的制备 | 第77页 |
| ·羊膜来源 | 第77页 |
| ·胎盘羊膜的制备 | 第77页 |
| 讨论 | 第77-79页 |
| 小结 | 第79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 第四部分 胎盘羊膜包裹脱细胞同种异体神经复合BDNFCNTF转染BMSCs纤维蛋白胶桥接的修复周围神经缺损的实验研究 | 第82-118页 |
| 1. 材料与方法 | 第82-89页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·主要实验设备 | 第82-83页 |
| ·主要试剂 | 第83-84页 |
| ·主要试剂配制 | 第84-85页 |
| ·BDNF和CNTF表达载体构建及在骨髓间充质干细胞中表达(见第2章) | 第85页 |
| ·脱细胞同种异体神经(chemical extracted acellular nerveallograft,CEANA)和胎盘羊膜的制备(见第三章) | 第85页 |
| ·周围神经缺损动物模型制备及分组 | 第85-86页 |
| ·手术方法 | 第86-89页 |
| ·手术具体步骤 | 第86-89页 |
| 2. 观察指标与方法 | 第89-91页 |
| ·大体观察 | 第89页 |
| ·坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI) | 第89-90页 |
| ·小腿三头肌湿重恢复率测定 | 第90页 |
| ·肌电图检测 | 第90页 |
| ·组织形态学观察 | 第90-91页 |
| ·免疫印迹检测 | 第91页 |
| 3 统计方法 | 第91页 |
| 4 结果 | 第91-101页 |
| ·一般情况 | 第91-92页 |
| ·两组的移植段神经大体观察 | 第92-94页 |
| ·SSI测定 | 第94-95页 |
| ·小腿三头肌湿重恢复率测定 | 第95-96页 |
| ·轴突计数 | 第96页 |
| ·神经电生理检测 | 第96-101页 |
| ·再生髓鞘HE染色 | 第98-99页 |
| ·移植段神经免疫组化染色 | 第99-101页 |
| ·免疫印迹检测结果 | 第101页 |
| 5. 讨论 | 第101-109页 |
| ·BDNF和CNTF与周围神经的修复 | 第102-104页 |
| ·BMSCs和神经的修复 | 第104-105页 |
| ·脱细胞的再生室和同种异体神经与周围神经缺损的修复 | 第105-106页 |
| ·同种异体神经复合BDNF和CNTF转染BMSCs生物蛋白胶桥接的修复周围神经缺损的结果分析 | 第106-109页 |
| 小结 | 第109页 |
| 参考文献 | 第109-118页 |
| 全文结论 | 第118-119页 |
| 文献综述：应用组织工程和基因工程技术对周围神经损伤的修复 | 第119-133页 |
| 一. 神经支架 | 第119-121页 |
| 二. 种子细胞 | 第121-122页 |
| 三、关于生物膜 | 第122-123页 |
| 四、移植材料形成神经再生室 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 攻读博士期间发表的论文、著作及获得的奖励 | 第134-135页 |
