| 中文摘要 | 第1-14页 |
| 英文摘要 | 第14-17页 |
| 前言 | 第17-35页 |
| 1 植物内生细菌的研究概况 | 第18-23页 |
| ·植物内生细菌的定义 | 第18页 |
| ·植物内生细菌的种类和种群数量 | 第18-23页 |
| 2 植物内生细菌研究的主要内容及其研究现状 | 第23-30页 |
| ·植物内生菌的生物学作用 | 第23-26页 |
| ·内生细菌的固氮作用 | 第23-24页 |
| ·促进植物生长作用 | 第24-25页 |
| ·增强宿主植物抗逆境、防病等作用 | 第25-26页 |
| ·植物内生细菌的改造与利用 | 第26-27页 |
| ·植物内生细菌的内生定殖 | 第27-29页 |
| ·植物内生细菌的来源 | 第27页 |
| ·植物内生细菌的侵入途径 | 第27-29页 |
| ·植物内生细菌的定殖 | 第29页 |
| ·植物内生细菌定殖的检测方法 | 第29-30页 |
| 3 纤维素酶的研究进展 | 第30-32页 |
| ·纤维素酶的分类 | 第31页 |
| ·纤维素降解细菌的研究概况 | 第31-32页 |
| ·纤维素酶的分子生物学研究 | 第32页 |
| 4 果胶酶的研究概况 | 第32-35页 |
| ·果胶酶的分类 | 第32-33页 |
| ·果胶降解微生物的研究概况 | 第33页 |
| ·果胶酶的分子生物学研究 | 第33-35页 |
| 第一章 内生细菌的gfp 基因标记及标记菌株的生物学特性研究 | 第35-59页 |
| 1 材料和方法 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第35页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·rpsD 基因启动子的克隆 | 第37-44页 |
| ·模板的制备 | 第37-38页 |
| ·PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第39页 |
| ·PCR 扩增产物的纯化 | 第39页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆 | 第39-41页 |
| ·目的基因的检测 | 第41页 |
| ·表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·重组表达载体的检测 | 第42页 |
| ·标记菌的获得 | 第42-43页 |
| ·标记菌株发光表型观察 | 第43页 |
| ·GFP 标记对菌株生长的影响 | 第43页 |
| ·标记菌株稳定性测定 | 第43页 |
| ·标记菌株在小白菜和番茄体内的定殖 | 第43-44页 |
| ·野生菌株与标记菌株在植物体内定殖数量的比较 | 第44页 |
| ·野生菌株与标记菌株抑菌效果的比较 | 第44页 |
| ·标记菌株在植物组织中的切片观察 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-55页 |
| ·rpsD 基因启动子的 PCR 扩增及测序 | 第44-46页 |
| ·重组质粒 pS4GFP 的构建 | 第46页 |
| ·标记菌株的获得 | 第46页 |
| ·外源基因标记对菌株生长的影响 | 第46-48页 |
| ·外源基因标记对菌株 BS2 生长的影响 | 第47-48页 |
| ·外源基因标记对菌株 TB2 生长的影响 | 第48页 |
| ·标记菌的遗传稳定性研究 | 第48-49页 |
| ·标记菌株在植物体内的定殖测定 | 第49-51页 |
| ·平板记数法对标记菌株 BS2-gfp 在小白菜组织内的定殖测定 | 第49-50页 |
| ·平板记数法对标记菌株 TB2-gfp 在番茄组织内的定殖测定 | 第50-51页 |
| ·野生菌株与标记菌株在植物体内定殖数量的比较分析 | 第51-53页 |
| ·菌株标记前后对真菌的抑菌效果比较 | 第53-54页 |
| ·GFP 标记菌株在植物组织中的切片观察 | 第54-55页 |
| ·荧光显微镜观察植物根表的 GFP 标记菌 | 第54-55页 |
| ·荧光显微镜观察植物组织内的 GFP 标记菌 | 第55页 |
| 3 小结与讨论 | 第55-59页 |
| 第二章 芽孢杆菌内切β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆和原核表达分析 | 第59-80页 |
| 1 材料和方法 | 第59-67页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·菌株和质粒 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-67页 |
| ·内生细菌 BS2、TB2 基因组 DNA 的提取 | 第60-63页 |
| ·目的 DNA 扩增引物的设计与合成 | 第63页 |
| ·目的 DNA 的扩增及其产物纯化 | 第63页 |
| ·PCR 扩增产物的克隆 | 第63-64页 |
| ·目的基因的检测 | 第64页 |
| ·克隆片段的分析方法 | 第64页 |
| ·bglC 基因表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·重组表达载体的检测 | 第65页 |
| ·BglC 蛋白表达及其检测 | 第65-66页 |
| ·酶的生物学特性研究 | 第66-67页 |
| 2 结果与分析 | 第67-78页 |
| ·克隆载体的构建与验证以及目的基因的序列分析 | 第67-73页 |
| ·β-1,4-内切葡聚糖酶基因的 PCR 扩增 | 第67页 |
| ·阳性克隆载体的鉴定 | 第67-68页 |
| ·克隆片段的 DNA 序列测定及同源性分析 | 第68-72页 |
| ·菌株 BS2、TB2 内切葡聚糖酶的信号肽切割位点分析 | 第72-73页 |
| ·bglC 基因表达载体的酶切鉴定 | 第73页 |
| ·BglC 蛋白 SDS-PAGE 电泳检测 | 第73页 |
| ·平板检测β-1,4-内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达活性 | 第73-75页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第75页 |
| ·酶的生物学特性 | 第75-78页 |
| ·酶反应的最适pH | 第75页 |
| ·酶的pH 稳定性 | 第75-76页 |
| ·酶反应的最适温度 | 第76页 |
| ·酶的热稳定性 | 第76-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| 第三章 内切β-1,4-葡聚糖酶基因在芽孢杆菌中的表达以及与定殖关系的研究 | 第80-101页 |
| 1 材料和方法 | 第80-88页 |
| ·材料 | 第80-83页 |
| ·菌株和质粒 | 第80页 |
| ·植物材料 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80-82页 |
| ·培养基 | 第82页 |
| ·主要仪器设备 | 第82-83页 |
| ·方法 | 第83-88页 |
| ·bglC 基因表达盒的构建 | 第83-85页 |
| ·bglC 基因表达盒扩增产物的克隆 | 第85页 |
| ·克隆载体的检测 | 第85页 |
| ·过表达载体的构建 | 第85-86页 |
| ·同源重组片段的克隆 | 第86页 |
| ·敲除载体pMUTIN-GFP~+-kn 的构建 | 第86-87页 |
| ·bglC 基因突变体的筛选 | 第87-88页 |
| ·bglC 基因互补转化子的筛选 | 第88页 |
| ·酶活测定 | 第88页 |
| ·突变体接种植物体分析 | 第88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-99页 |
| ·bglC 基因表达盒的获得 | 第88-89页 |
| ·过表达载体的获得 | 第89页 |
| ·敲除载体的构建 | 第89-92页 |
| ·同源重组片段的克隆 | 第89-91页 |
| ·敲除载体pMUTIN-GFP~+-kn 的获得 | 第91-92页 |
| ·突变菌株的获得 | 第92-93页 |
| ·过表达突变体的荧光检测 | 第93页 |
| ·敲除突变体的分子检测结果 | 第93-95页 |
| ·酶活测定结果 | 第95-96页 |
| ·突变体在植物体内定殖检测分析 | 第96-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 第四章 芽孢杆菌果胶酶基因的克隆和原核表达分析 | 第101-120页 |
| 1 材料和方法 | 第102-107页 |
| ·材料 | 第102-104页 |
| ·菌株和质粒 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102页 |
| ·培养基 | 第102页 |
| ·主要仪器设备 | 第102-104页 |
| ·方法 | 第104-107页 |
| ·果胶酶基因部分片段的克隆 | 第104-105页 |
| ·果胶酶基因 ORF 的克隆 | 第105-106页 |
| ·果胶酶基因表达载体的构建 | 第106-107页 |
| ·重组表达载体的检测 | 第107页 |
| ·果胶酶蛋白表达及其检测 | 第107页 |
| 2 结果与分析 | 第107-117页 |
| ·果胶酶基因部分片段的克隆及序列分析 | 第107-109页 |
| ·果胶酶基因部分片段的 PCR 扩增 | 第107-108页 |
| ·阳性克隆载体的鉴定 | 第108页 |
| ·克隆片段的 DNA 序列测定及同源性分析 | 第108-109页 |
| ·克隆载体的构建与验证以及目的基因的序列分析 | 第109-116页 |
| ·果胶酶基因 ORF 片段的 PCR 扩增 | 第109-110页 |
| ·阳性克隆载体的鉴定 | 第110页 |
| ·克隆片段的 DNA 序列测定及同源性分析 | 第110-115页 |
| ·菌株 BS2、TB2 果胶酶的信号肽切割位点分析 | 第115-116页 |
| ·果胶酶基因表达载体的酶切鉴定 | 第116页 |
| ·果胶酶蛋白 SDS-PAGE 电泳检测 | 第116-117页 |
| ·平板检测果胶酶基因在大肠杆菌中的表达活性 | 第117页 |
| 3 讨论 | 第117-120页 |
| 第五章 果胶酶基因在芽孢杆菌中的表达以及与定殖关系的研究 | 第120-136页 |
| 1 材料和方法 | 第120-126页 |
| ·材料 | 第120-121页 |
| ·菌株和质粒 | 第120页 |
| ·植物材料 | 第120页 |
| ·主要试剂 | 第120页 |
| ·培养基 | 第120页 |
| ·主要仪器设备 | 第120-121页 |
| ·方法 | 第121-126页 |
| ·果胶酶全长基因的克隆 | 第121-123页 |
| ·果胶酶过表达载体的构建 | 第123-124页 |
| ·果胶酶基因过表达突变体的筛选 | 第124页 |
| ·果胶酶敲除载体的构建 | 第124-126页 |
| ·果胶酶基因敲除突变体的转化 | 第126页 |
| ·敲除突变体的分子检测 | 第126页 |
| ·突变体接种植物体分析 | 第126页 |
| 2 结果与分析 | 第126-134页 |
| ·果胶酶全长基因的 PCR 扩增 | 第126-127页 |
| ·阳性克隆载体的鉴定 | 第127页 |
| ·果胶酶全长基因测序结果 | 第127页 |
| ·果胶酶过表达载体的获得 | 第127-129页 |
| ·过表达突变菌株的平板检测 | 第129页 |
| ·果胶酶基因同源重组片段的 PCR 扩增 | 第129-130页 |
| ·敲除载体的获得 | 第130-131页 |
| ·敲除突变体的转化及分子检测结果 | 第131页 |
| ·突变体在植物体内定殖检测分析 | 第131-134页 |
| 3 讨论 | 第134-136页 |
| 全文总结 | 第136-137页 |
| 有待进一步研究的内容 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-152页 |
| 博士期间发表的文章 | 第152-153页 |
| 致谢 | 第153页 |
