| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| ·纤维素和纤维素酶 | 第8页 |
| ·纤维素酶的组成 | 第8-10页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第10页 |
| ·酿酒酵母的转化方法 | 第10页 |
| ·酵母的表达载体 | 第10-11页 |
| ·在酿酒酵母中异源表达纤维素酶的研究进展 | 第11-13页 |
| ·酿酒酵母的内源性糖降解酶 | 第11页 |
| ·酿酒酵母中表达纤维素酶的研究进展 | 第11-12页 |
| ·酿酒酵母异源表达纤维素酶的研究 | 第12-13页 |
| ·分子的体外进化 | 第13-14页 |
| ·体外分子进化在纤维素酶方面的应用 | 第14-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·酶与试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器设备 | 第17页 |
| ·方法与步骤 | 第17-26页 |
| ·三种木霉基因组的提取 | 第17页 |
| ·引物设计 | 第17-18页 |
| ·三种内切葡聚糖酶基因eg1全长的扩增 | 第18页 |
| ·重叠PCR去除木霉eg1内含子 | 第18-20页 |
| ·内切葡聚糖酶基因eg1酵母表达载体的构建 | 第20页 |
| ·化学转化酿酒酵母 | 第20-21页 |
| ·刚果红染色法定性检测酶活 | 第21页 |
| ·三种木霉内切葡聚糖酶基因eg1的DNAshuffling | 第21-22页 |
| ·改组后重组子的转化及筛选 | 第22页 |
| ·EGI的CMCase活力测定 | 第22-24页 |
| ·重组蛋白的SDA-PAGE分析 | 第24-25页 |
| ·四种EG序列二级结构和三级结构预测 | 第25-26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-40页 |
| ·三种木霉内切葡聚糖酶基因eg1全长的扩增 | 第26-28页 |
| ·三种木霉无内含子内切葡聚糖酶基因eg1的克隆 | 第28页 |
| ·重组表达质粒pYE-Reg1和pYEα-Reg1的构建及转化 | 第28-29页 |
| ·长枝木霉和拟康氏木霉eg1在酿酒酵母中的分泌表达 | 第29页 |
| ·DNase酶解预处理 | 第29-30页 |
| ·无引物PCR片段的重聚 | 第30页 |
| ·有引物PCR扩增重组片段 | 第30页 |
| ·eg1改组酵母突变库的构建及筛选 | 第30-32页 |
| ·改组EGI酶活测定及分析 | 第32-33页 |
| ·New8EGI的SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·改组新基因的亚克隆与序列分析 | 第34-40页 |
| ·改组新基因的亚克隆 | 第34-35页 |
| ·新基因蛋白质一级结构分析 | 第35-36页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第36-39页 |
| ·蛋白质三级结构预测 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-42页 |
| ·木霉内切葡聚糖酶酿酒酵母筛选体系的建立 | 第40页 |
| ·DNA改组突变库的构建及筛选 | 第40-42页 |
| 6 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 个人简介及硕士期间论文发表情况 | 第49页 |
