| 英文缩略词表 | 第1-8页 |
| 中方摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10页 |
| 1 研究综述 | 第10-20页 |
| ·天然免疫系统概述 | 第10-11页 |
| ·Toll样受体 | 第11-15页 |
| ·Toll的发现 | 第11-12页 |
| ·Toll/IL-1R家族的来源 | 第12页 |
| ·Toll样受体的家族成员、结构特点及其特异配体 | 第12-15页 |
| ·TLRs之间及TLRs和辅助蛋白之间的互作 | 第15页 |
| ·TLRs介导的信号途径 | 第15-18页 |
| ·依赖Myd88型信号通路 | 第16-17页 |
| ·不依赖Myd88型/依赖TRIF信号通路 | 第17-18页 |
| ·TIR结构域在TLRs介导信号途径中的重要作用 | 第18页 |
| ·TIRAP | 第18-19页 |
| ·本课题的意义和目的 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·TIRAP基因、菌种及质粒 | 第21-22页 |
| ·仪器 | 第22页 |
| ·实验方案设计与优化 | 第22-23页 |
| ·TIRAPd的PCR扩增与pET15b—TIRAPd重组质粒的鉴定 | 第22页 |
| ·TIRAPd的诱导表达和纯化 | 第22-23页 |
| ·TIRAP结构域TIR的三维模建 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| ·TIRAPd序列的确定 | 第24页 |
| ·引物设计和PCR扩增 | 第24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分析 | 第24-25页 |
| ·核酸回收 | 第25页 |
| ·酶切回收产物和表达载体pET15b | 第25页 |
| ·连接 | 第25-26页 |
| ·转化和筛选 | 第26页 |
| ·碱裂解—中和法提取质粒 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的酶切分析 | 第27页 |
| ·序 | 第27页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·SDS—PAGE电泳 | 第28-29页 |
| ·菌体超声破碎 | 第29页 |
| ·蛋白的镍亲和柱纯化 | 第29-30页 |
| ·蛋白的分子筛纯化 | 第30页 |
| ·TIRAP中TIR结构域的三维模建 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-38页 |
| ·TIRAPd的基因序列和TIR结构域蛋白序列预测 | 第31-32页 |
| ·TIRAPd的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·pET15b—TIRAPd重组质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·pET15b—TIRAPd重组质粒的测序 | 第33-34页 |
| ·TIRAPd的诱导表达和温度对表达的影响 | 第34页 |
| ·TIRAPd的镍亲和柱纯化 | 第34-36页 |
| ·TIRAPd分子筛纯化 | 第36-37页 |
| ·TIRAP蛋白TIR结构域的三维模型及其分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| ·表达菌株的选择 | 第38-39页 |
| ·表达载体的选择 | 第39页 |
| ·蛋白质的稳定性 | 第39页 |
| ·TIRAP中TIR结构域的三维模型的构建 | 第39页 |
| ·TIRAP与其它蛋白相互作用的初步研究 | 第39-40页 |
| 5 小结与展望 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-46页 |
| 附录一 常用生化试剂的配制 | 第46-47页 |
| 附录二 SDS-PAGE所需的缓冲液 | 第47-49页 |
| 附录三 蛋白的镍亲和柱纯化所需的缓冲液及再生方法 | 第49-51页 |
| 附录四 分子筛纯化所需的缓冲液 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |