| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第8-17页 |
| 实验材料 | 第17-20页 |
| 1．主要化学试剂 | 第17-18页 |
| 2．细胞和质粒 | 第18页 |
| 3．耗材 | 第18页 |
| 4．TPM1 3’UTR 克隆引物与合成的小 RNA | 第18-19页 |
| 5．主要仪器 | 第19页 |
| 6．软件及网络资源 | 第19-20页 |
| 实验方法 | 第20-30页 |
| 1 TPM1 3’UTR 报告载体的构建 | 第20-26页 |
| ·目的片段的制备 | 第20-23页 |
| ·克隆载体的构建 | 第23-25页 |
| ·xba1 和 HpaI 双酶切反应 | 第25页 |
| ·连接反应 | 第25-26页 |
| ·转化和筛选阳性克隆 | 第26页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第26页 |
| 2 miR-155 靶点的验证 | 第26-30页 |
| ·miR-155 mimics 与报告载体共转染 293T 细胞 | 第26页 |
| ·报告基因的表达检测 | 第26-30页 |
| 实验结果 | 第30-34页 |
| 1 TPM1 3’UTR 报告载体的构建 | 第30-32页 |
| ·TPM13’UTR 的扩增 | 第30-31页 |
| ·TPM13’UTR 与克隆载体 pUCm-T 的连接 | 第31页 |
| ·TPM13’UTR 与报告载体 pEGFP-N1 的连接 | 第31-32页 |
| 2 mir-155 靶序列的验证 | 第32-34页 |
| 讨论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 附录 | 第38-43页 |
| 1. 缩略词 | 第38-40页 |
| 2. 主要溶液的配制 | 第40-41页 |
| 3. DH5α 感受态制备 | 第41-43页 |
| 综述 miRNA in breast cancer tumorigenesis | 第43-57页 |
| Reference | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第58-59页 |
