| 缩写词表 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-34页 |
| 1.低温对植物细胞造成伤害的机理 | 第13-18页 |
| 2.植物抗冻分子生物学机理 | 第18-24页 |
| 3.冷调节基因COR的研究 | 第24-30页 |
| 4.高山冰缘植物研究概况 | 第30-33页 |
| 5.选题的目的与意义 | 第33-34页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第34-53页 |
| 第一节 高山离子芥冷调节基因CbCOR15的克隆与序列分析 | 第34-39页 |
| 1.实验材料 | 第34-35页 |
| 2.实验方法 | 第35-39页 |
| ·高山离子芥冷调节基因CbCOR15的克隆 | 第35-37页 |
| ·CbCOR15基因生物信息学和分子进化分析 | 第37-39页 |
| 第二节 高山离子芥冷调节基因CbCOR15表达模式的分析 | 第39-41页 |
| 1.实验材料 | 第39页 |
| 2.实验方法 | 第39-41页 |
| ·各种胁迫处理 | 第39页 |
| ·RNA的提取 | 第39页 |
| ·半定量PCR | 第39-41页 |
| 第三节 CbCOR15基因的原核表达及抗体制备 | 第41-45页 |
| 1.实验材料 | 第41页 |
| 2.实验方法 | 第41-45页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| ·蛋白的诱导表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·抗体制备 | 第43页 |
| ·ELISA检测 | 第43-44页 |
| ·抗体纯化 | 第44-45页 |
| 第四节 农杆菌介导的CbCOR15基因转化烟草 | 第45-53页 |
| 1.实验材料 | 第45页 |
| 2.实验方法 | 第45-53页 |
| ·含有CbCOR15基因植物表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·含有CbCOR15m植物表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·三亲交配法将构建好的植物表达载体转入农杆菌GV3101 | 第47页 |
| ·转基因烟草的得到 | 第47-48页 |
| ·转化拷贝数的鉴定 | 第48-49页 |
| ·转基因烟草抗性植株的分子鉴定 | 第49-51页 |
| ·转基因烟草的抗逆性分析 | 第51-53页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第53-102页 |
| 第一节 高山离子芥冷调节基因CbCOR15的克隆与序列分析 | 第53-70页 |
| 1.CbCOR15基因的克隆 | 第53-55页 |
| 2.CbCOR15基因生物信息学和分子进化分析 | 第55-60页 |
| 3.推测的CbCor15蛋白的特征 | 第60-68页 |
| 4.小结 | 第68-70页 |
| 第二节 高山离子芥冷调节基因CbCOR15表达模式的分析 | 第70-78页 |
| 1.CbCOR15组织特异性表达分析 | 第70页 |
| 2.冷冻胁迫过程中CbCOR15的转录特征 | 第70-73页 |
| 3.CbCOR15基因对干旱胁迫(PEG)处理的响应 | 第73-74页 |
| 4.CbCOR15基因对脱落酸(ABA)处理的响应 | 第74-76页 |
| 5.CbCOR15基因对H_2O_2处理的响应 | 第76页 |
| 6.小结 | 第76-78页 |
| 第三节 CbCOR15基因的原核表达及抗体制备 | 第78-81页 |
| 1.GST-COR融合蛋白的诱导表达 | 第78页 |
| 2.GST-COR融合蛋白的纯化 | 第78-79页 |
| 3.抗体的制备和效价检测 | 第79-80页 |
| 4.小结 | 第80-81页 |
| 第四节 农杆菌介导的CbCOR15基因转化烟草 | 第81-102页 |
| 1.植物表达载体的构建 | 第82-84页 |
| 2.转基因烟草的获得 | 第84-87页 |
| 3.转基因烟草的检测 | 第87-93页 |
| 4.转基因烟草在冷胁迫(2℃)下的抗性分析 | 第93-98页 |
| 5.转基因烟草抗冻性的分析 | 第98-101页 |
| 6.小结 | 第101-102页 |
| 第四章 讨论 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
| 在读期间的科研成果 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
