中文摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-14页 |
1 前言 | 第14-27页 |
·植物油脂合成的生化过程 | 第14-16页 |
·植物油脂简介 | 第14页 |
·植物油脂的应用 | 第14-16页 |
·植物油脂在食品方面的应用 | 第14页 |
·植物油脂在工业方面的应用 | 第14-15页 |
·植物油脂在生物柴油上的应用 | 第15-16页 |
·植物油脂在植物中生产 EPA/DHA 方面的应用 | 第16页 |
·植物油脂面临的问题 | 第16页 |
·油料作物基因工程改造的原理 | 第16-20页 |
·植物油脂合成的生物化学过程 | 第17-20页 |
·油脂合成过程中部分关键酶介绍 | 第20-24页 |
·乙酰辅酶 A 羧化酶 | 第21-22页 |
·酰基转移酶 | 第22-23页 |
·甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH) | 第23-24页 |
·长片段基因克隆方法 | 第24-25页 |
·本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
2 材料与方法 | 第27-40页 |
·实验材料 | 第27-28页 |
·植物材料及生长条件 | 第27页 |
·马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans)及生长条件 | 第27页 |
·酿酒酵母 BY4741 及生长条件 | 第27页 |
·强壮前沟藻(Amphidinium carterae)及生长条件 | 第27页 |
·菌株及质粒 | 第27页 |
·酶及生化试剂 | 第27-28页 |
·本论文所用引物见附录 | 第28页 |
·实验方法 | 第28-40页 |
·基因组 DNA 提取(SDS 法) | 第28页 |
·总 RNA 的提取(TriZol 法) | 第28-29页 |
·RNA 甲醛变性胶电泳检测 | 第29-30页 |
·反转录 cDNA 第一链的合成 | 第30-31页 |
·PCR 扩增 | 第31页 |
·连接反应(以 pMD18-T simple vector 为例) | 第31页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
·碱法小量提取质粒 DNA | 第32-33页 |
·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第33页 |
·DNA 片段的回收 | 第33-34页 |
·表达载体的构建(包括酵母表达载体和植物表达载体) | 第34页 |
·酿酒酵母的转化 | 第34页 |
·酿酒酵母的诱导表达及菌体收集 | 第34-35页 |
·根癌农杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第35-36页 |
·根癌农杆菌冻融法感受态细胞的制备 | 第35页 |
·根癌农杆菌电转化感受态制备 | 第35-36页 |
·冻融法转化农杆菌 | 第36页 |
·电击法转化农杆菌 | 第36页 |
·农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第36-37页 |
·种子处理 | 第36页 |
·移栽拟南芥 | 第36-37页 |
·拟南芥转化 | 第37页 |
·转基因植株分析 | 第37-38页 |
·脂肪酸的提取及分析 | 第38页 |
·甘油含量的测定 | 第38-40页 |
·测定原理 | 第38页 |
·方法步骤 | 第38-40页 |
3 结果与分析 | 第40-53页 |
·马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans)的获得 | 第40页 |
·PinGPDH1 基因的克隆 | 第40-41页 |
·P.infestans 全长 cDNA 的获得 | 第40页 |
·Phytophthora infestans 中 PinGPDH1 基因的 PCR 扩增 | 第40-41页 |
·PinGPDH1 基因进化树分析 | 第41-42页 |
·酵母中鉴定 PinGPDH1 | 第42-46页 |
·酵母表达载体的构建 | 第43页 |
·PinGPDH1 活性测定 | 第43-45页 |
·组织甘油含量酶法试剂盒使用 | 第43页 |
·标准曲线的确定及甘油浓度的确定 | 第43-45页 |
·PinGPDH1 耐盐实验 | 第45-46页 |
·PinGPDH1 植物中瞬时表达定位 | 第46-47页 |
·拟南芥中 PinGPDH1 功能验证 | 第47-49页 |
·表达载体构建 | 第47页 |
·拟南芥 GPDH 突变体回复突变 | 第47-49页 |
·拟南芥突变体纯合体筛选 | 第48-49页 |
·早花现象对照 | 第49页 |
·Col-0 拟南芥中超表达 pCambia2300napin-PinGPDH1 | 第49页 |
·马铃薯致病疫霉中 ACCase 基因的克隆 | 第49-50页 |
·强壮前沟藻中 ACCase 和 GPDH 基因的克隆 | 第50-53页 |
·甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆 | 第50-52页 |
·乙酰辅酶 A 羧化酶酶基因的克隆 | 第52-53页 |
4. 讨论 | 第53-56页 |
·GPDH 基因的研究 | 第53-54页 |
·ACCase 基因的研究 | 第54-56页 |
5 结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-64页 |
附录 | 第64-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |