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油脂合成过程中甘油三磷酸脱氢酶基因及乙酰辅酶A羧化酶基因的克隆与鉴定

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 前言第14-27页
   ·植物油脂合成的生化过程第14-16页
     ·植物油脂简介第14页
     ·植物油脂的应用第14-16页
       ·植物油脂在食品方面的应用第14页
       ·植物油脂在工业方面的应用第14-15页
       ·植物油脂在生物柴油上的应用第15-16页
       ·植物油脂在植物中生产 EPA/DHA 方面的应用第16页
     ·植物油脂面临的问题第16页
   ·油料作物基因工程改造的原理第16-20页
     ·植物油脂合成的生物化学过程第17-20页
   ·油脂合成过程中部分关键酶介绍第20-24页
     ·乙酰辅酶 A 羧化酶第21-22页
     ·酰基转移酶第22-23页
     ·甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)第23-24页
   ·长片段基因克隆方法第24-25页
   ·本研究的目的和意义第25-27页
2 材料与方法第27-40页
   ·实验材料第27-28页
     ·植物材料及生长条件第27页
     ·马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans)及生长条件第27页
     ·酿酒酵母 BY4741 及生长条件第27页
     ·强壮前沟藻(Amphidinium carterae)及生长条件第27页
     ·菌株及质粒第27页
     ·酶及生化试剂第27-28页
     ·本论文所用引物见附录第28页
   ·实验方法第28-40页
     ·基因组 DNA 提取(SDS 法)第28页
     ·总 RNA 的提取(TriZol 法)第28-29页
     ·RNA 甲醛变性胶电泳检测第29-30页
     ·反转录 cDNA 第一链的合成第30-31页
     ·PCR 扩增第31页
     ·连接反应(以 pMD18-T simple vector 为例)第31页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化第31-32页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第31-32页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化第32页
     ·碱法小量提取质粒 DNA第32-33页
     ·质粒 DNA 的酶切鉴定第33页
     ·DNA 片段的回收第33-34页
     ·表达载体的构建(包括酵母表达载体和植物表达载体)第34页
     ·酿酒酵母的转化第34页
     ·酿酒酵母的诱导表达及菌体收集第34-35页
     ·根癌农杆菌感受态细胞的制备及转化第35-36页
       ·根癌农杆菌冻融法感受态细胞的制备第35页
       ·根癌农杆菌电转化感受态制备第35-36页
       ·冻融法转化农杆菌第36页
       ·电击法转化农杆菌第36页
     ·农杆菌介导的拟南芥遗传转化第36-37页
       ·种子处理第36页
       ·移栽拟南芥第36-37页
       ·拟南芥转化第37页
     ·转基因植株分析第37-38页
     ·脂肪酸的提取及分析第38页
     ·甘油含量的测定第38-40页
       ·测定原理第38页
       ·方法步骤第38-40页
3 结果与分析第40-53页
   ·马铃薯致病疫霉(Phytophthora infestans)的获得第40页
   ·PinGPDH1 基因的克隆第40-41页
     ·P.infestans 全长 cDNA 的获得第40页
     ·Phytophthora infestans 中 PinGPDH1 基因的 PCR 扩增第40-41页
   ·PinGPDH1 基因进化树分析第41-42页
   ·酵母中鉴定 PinGPDH1第42-46页
     ·酵母表达载体的构建第43页
     ·PinGPDH1 活性测定第43-45页
       ·组织甘油含量酶法试剂盒使用第43页
       ·标准曲线的确定及甘油浓度的确定第43-45页
     ·PinGPDH1 耐盐实验第45-46页
   ·PinGPDH1 植物中瞬时表达定位第46-47页
   ·拟南芥中 PinGPDH1 功能验证第47-49页
     ·表达载体构建第47页
     ·拟南芥 GPDH 突变体回复突变第47-49页
       ·拟南芥突变体纯合体筛选第48-49页
       ·早花现象对照第49页
     ·Col-0 拟南芥中超表达 pCambia2300napin-PinGPDH1第49页
   ·马铃薯致病疫霉中 ACCase 基因的克隆第49-50页
   ·强壮前沟藻中 ACCase 和 GPDH 基因的克隆第50-53页
     ·甘油-3-磷酸脱氢酶基因的克隆第50-52页
     ·乙酰辅酶 A 羧化酶酶基因的克隆第52-53页
4. 讨论第53-56页
   ·GPDH 基因的研究第53-54页
   ·ACCase 基因的研究第54-56页
5 结论第56-57页
参考文献第57-64页
附录第64-71页
致谢第71-72页
攻读学位期间发表论文情况第72页

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