中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-12页 |
第一章 绪论 | 第12-22页 |
1.日本血吸虫生活史 | 第12-14页 |
·日本血吸虫生活史 | 第12-13页 |
·日本血吸虫童虫 | 第13页 |
·日本血吸虫致病 | 第13-14页 |
2.日本血吸虫疫苗研制现状 | 第14-21页 |
·血吸虫疫苗研制的必要性和可行性 | 第14-15页 |
·血吸虫疫苗研制现状 | 第15-21页 |
3.结语 | 第21-22页 |
第二章 日本血吸虫SjIM基因的构建、克隆及表达 | 第22-48页 |
摘要 | 第22-23页 |
1.试验材料 | 第23-27页 |
·试验试剂和酶 | 第23页 |
·试验仪器 | 第23页 |
·菌种、实验动物和寄生虫 | 第23页 |
·主要试剂配置 | 第23-26页 |
·主要引物 | 第26-27页 |
2.试验方法 | 第27-36页 |
·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
·重组质粒的抽提 | 第28-29页 |
·虫体蛋白的提取 | 第29页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
·转化步骤 | 第29-30页 |
·PCR产物回收纯化 | 第30页 |
·虫体mRNA的提取 | 第30-31页 |
·DNaseⅠ消化mRNA中的基因组DNA | 第31页 |
·纯化消化后的mRNA | 第31页 |
·合成虫体cDNA | 第31-32页 |
·SjIM基因的扩增 | 第32-33页 |
·SjIM基因的生物信息学分析 | 第33页 |
·构建重组质粒SjIM-pET-28a及其酶切鉴定 | 第33-34页 |
·重组质粒SjIM-pET-28a的表达时相分析 | 第34页 |
·重组质粒SjIM-pET-28a的原核表达条件摸索 | 第34-35页 |
·重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
·重组蛋白抗原性和免疫原性的鉴定 | 第36页 |
·SjIM基因在不同时期虫体内的表达分析 | 第36页 |
3.试验结果 | 第36-46页 |
·SjIM基因的克隆和生物信息学分析 | 第36-41页 |
·SjIM基因的表达和纯化 | 第41-45页 |
·SjIM-pET-28a重组蛋白的抗原性鉴定 | 第45-46页 |
·SjIM在不同发育期虫体中表达量的分析 | 第46页 |
4.讨论 | 第46-48页 |
第三章 日本血吸虫SjIM-pET-28a重组抗原的免疫保护试验 | 第48-54页 |
摘要 | 第48页 |
1.试验材料 | 第48页 |
·试验试剂 | 第48页 |
·菌株、实验动物及寄生虫 | 第48页 |
2.试验方法 | 第48-50页 |
·重组抗原的制备 | 第48-49页 |
·BALB/c小鼠的分组及感染 | 第49页 |
·虫体计数和肝脏减卵率 | 第49页 |
·ELISA方法检测小鼠血清特异性抗体IgG及其亚型IgG1和IgG2a的水平 | 第49-50页 |
3.试验结果 | 第50-53页 |
·BALB/c小鼠血清抗SjIM-pET28a特异性IgG抗体的检测 | 第50页 |
·BALB/c小鼠血清抗SjIM-pET28a特异性IgG1及IgG2a抗体的检测 | 第50-52页 |
·BALB/c小鼠免疫保护效果 | 第52-53页 |
4.讨论 | 第53-54页 |
第四章 日本血吸虫pVAX1-SIM的构建及其DNA疫苗的免疫保护试验 | 第54-62页 |
摘要 | 第54页 |
1.试验材料 | 第54-55页 |
·试验试剂和酶 | 第54页 |
·试验仪器 | 第54页 |
·菌种、实验动物和寄生虫 | 第54-55页 |
2.试验方法 | 第55-56页 |
·SjIM与pVAX1空质粒连接 | 第55页 |
·大量抽提质粒 | 第55页 |
·pVAX1-SjIM真核重组质粒的动物保护实验 | 第55-56页 |
3.试验结果 | 第56-60页 |
·重组真核质粒pVAX1-SjIM的构建 | 第56-57页 |
·BALB/c小鼠血清抗SjIM特异性IgG、IgG1及IgG2a抗体的检测 | 第57-59页 |
·BALB/c小鼠的免疫保护试验结果 | 第59-60页 |
4.讨论 | 第60-62页 |
全文总结 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
附录 | 第73-74页 |