麻疯树毒蛋白curcin的表达、纯化、复性及体外活性和几丁质酶性质的研究
| 图片目录 | 第1-11页 |
| 表格目录 | 第11-12页 |
| 中文摘要 | 第12-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 第一部分 麻疯树毒蛋白基因的表达、纯化及活性研究 | 第18-81页 |
| 第一章 麻疯树毒蛋白基因的克隆 | 第19-31页 |
| 摘要 | 第19页 |
| 1 引言 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-26页 |
| ·实验材料 | 第20-22页 |
| ·植物材料、菌株、质粒及载体 | 第20-21页 |
| ·试剂盒、酶 | 第21-22页 |
| ·引物 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-26页 |
| ·麻疯树种子总RNA的提取 | 第23页 |
| ·反转录 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增 | 第24页 |
| ·PCR片段的回收、连接 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增片段的转化和鉴定 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·转化子的鉴定 | 第26页 |
| ·测序与分析 | 第26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-27页 |
| ·麻疯树未成熟种子RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·麻疯树curein目标片段的获得 | 第27页 |
| 4.讨论 | 第27-28页 |
| 5.小结 | 第28页 |
| 参考文献 | 第28-31页 |
| 第二章 麻疯树毒蛋白基因在大肠杆菌中的表达 | 第31-51页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 1 引言 | 第31-33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-43页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·材料、菌株及质粒载体 | 第33-35页 |
| ·试剂、试剂盒、酶 | 第35-36页 |
| ·引物 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·目的基因的获得 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·表达载体的制备 | 第38-39页 |
| ·表达片段的酶切、连接及克隆 | 第39-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第40页 |
| ·表达产物菌落Western鉴定 | 第40-41页 |
| ·表达产物的Western印迹分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·目的片段的获取 | 第43页 |
| ·表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·重组表达质粒的筛选和检测 | 第44-47页 |
| ·重组表达质粒的双酶切检测 | 第44-45页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的菌落Western检测 | 第45-46页 |
| ·表达产物的Western-blot检测 | 第46-47页 |
| 4.讨论 | 第47-48页 |
| 5.小结 | 第48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 第三章 麻疯树毒蛋白基因表达条件的优化 | 第51-64页 |
| 摘要 | 第51页 |
| 1 引言 | 第51-53页 |
| 2 材料和方法 | 第53-57页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·生物材料 | 第53页 |
| ·试剂 | 第53-54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·不同诱导剂下的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·不同温度下的诱导表达 | 第55-56页 |
| ·不同诱导时间下的诱导表达 | 第56页 |
| ·不同抗菌素浓度下的诱导表达 | 第56-57页 |
| ·不同诱导剂加入时间下的诱导表达 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·不同诱导剂下的诱导表达 | 第57-59页 |
| ·不同温度及诱导时间下的诱导表达 | 第59-60页 |
| ·不同抗菌素含量下的诱导表达 | 第60页 |
| ·不同诱导剂加入时间下的诱导表达 | 第60-61页 |
| 4.讨论 | 第61-62页 |
| 5.小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第四章 重组蛋白的纯化、复性及活性测定 | 第64-81页 |
| 摘要 | 第64页 |
| 1 引言 | 第64-66页 |
| 2 材料和方法 | 第66-71页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·生物材料 | 第66-67页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-71页 |
| ·包涵体的制备 | 第67-68页 |
| ·包涵体的溶解和纯化 | 第68页 |
| ·重组蛋白的活性检测 | 第68-71页 |
| ·对无细胞系蛋白质体外合成翻译的影响 | 第68-69页 |
| ·抗病毒活性的检测 | 第69-70页 |
| ·体外抑制肿瘤细胞的生长 | 第70-71页 |
| ·诱导S-180细胞的凋亡 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-75页 |
| ·包涵体的纯化与复性 | 第71-72页 |
| ·不同变性剂对包涵体溶解的影响 | 第71-72页 |
| ·包涵体的纯化 | 第72页 |
| ·重组蛋白的体外活性测定 | 第72-75页 |
| ·抑制无细胞系蛋白质体外翻译的能力 | 第72-73页 |
| ·重组蛋白对病毒的抑制 | 第73页 |
| ·抑制肿瘤细胞的生长 | 第73-74页 |
| ·重组蛋白诱导S-180细胞凋亡 | 第74-75页 |
| 4.讨论 | 第75-78页 |
| 5.小结 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 第二部分 麻疯树几丁质酶的研究 | 第81-91页 |
| 第五章 麻疯树几丁质酶基本性质的研究 | 第82-91页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 1 引言 | 第82-84页 |
| 2 材料和方法 | 第84-86页 |
| ·实验材料 | 第84-85页 |
| ·生物材料 | 第84页 |
| ·药品、试剂与器材 | 第84-85页 |
| ·实验方法 | 第85-86页 |
| ·几丁质酶粗提液的提取 | 第85页 |
| ·几丁质酶活性的测定 | 第85页 |
| ·不同提取条件下几丁质酶活性的测定 | 第85页 |
| ·不同反应温度下几丁质酶活性的测定 | 第85-86页 |
| ·不同反应时间下几丁质酶活性的测定 | 第86页 |
| ·不同部位几丁质酶活性的比较 | 第86页 |
| 3 结果与分析 | 第86-87页 |
| ·不同pH值对麻疯树几丁质酶活性的影响 | 第86-87页 |
| ·不同反应温度对几丁质酶活性的影响 | 第87页 |
| ·不同作用时间对几丁质酶活性的影响 | 第87页 |
| ·麻疯树幼苗不同部位几丁质酶活性的比较 | 第87页 |
| 4.讨论 | 第87-88页 |
| 5.小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 第三部分 文献综述 | 第91-125页 |
| 第六章 文献综述 | 第92-125页 |
| 摘要 | 第92页 |
| 1 几丁质酶的分类及结构特点 | 第92-98页 |
| ·几丁质酶的分类 | 第92-97页 |
| ·常规分类法 | 第92-93页 |
| ·Henrissat分类法 | 第93页 |
| ·Shinshi等的分类法 | 第93-97页 |
| ·几丁质酶的结构分类 | 第97-98页 |
| 2 几丁质酶的作用底物 | 第98-99页 |
| 3 几丁质酶的产生生物 | 第99-111页 |
| ·植物几丁质酶 | 第99-107页 |
| ·植物几丁质酶在植物防御中的作用 | 第100-105页 |
| ·抑制真菌菌丝生长和孢子萌发 | 第101-103页 |
| ·抑制细菌生长和分裂 | 第103-104页 |
| ·抗虫作用 | 第104页 |
| ·抗线虫、螨和病毒作用 | 第104-105页 |
| ·植物几丁质酶在共生中的作用 | 第105-106页 |
| ·植物几丁质酶在植物生长发育中的作用 | 第106页 |
| ·释放信号分子及其他作用 | 第106-107页 |
| ·微生物几丁质酶 | 第107-110页 |
| ·产生几丁质酶的微生物种类 | 第108-109页 |
| ·微生物几丁质酶的基本性质 | 第109页 |
| ·微生物几丁质酶的产生条件及作用机理 | 第109-110页 |
| ·无脊椎动物几丁质酶 | 第110页 |
| ·哺乳动物几丁质酶的类似几丁质酶的蛋白质 | 第110-111页 |
| 4.几丁质酶酶活的测定方法 | 第111-112页 |
| 5.几丁质酶的研究应用及前景展望 | 第112-115页 |
| ·几丁质酶的研究应用 | 第112-115页 |
| ·几丁质酶的应用及前景 | 第115页 |
| 参考文献 | 第115-125页 |
| 致谢 | 第125-127页 |
| 在读期间发表的文章 | 第127页 |
| 获奖情况 | 第127-128页 |
