| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 立题依据和论文总体设计 | 第14-26页 |
| 1 立题依据及研究现状 | 第14-24页 |
| ·立题依据 | 第14页 |
| ·研究现状 | 第14-24页 |
| ·基因与活性成分含量变异的相关性研究现状 | 第14-16页 |
| ·ISSR分子标记技术及其在植物遗传学中的应用现状 | 第16-19页 |
| ·甘草酸生物合成途径及其关键酶SQS基因研究现状 | 第19-21页 |
| ·基因表达差异与疾病发生、植物表型及化学成分含量变异的相关性研究现状 | 第21-24页 |
| 2 论文总体设计 | 第24-26页 |
| ·研究内容和研究方法 | 第24-25页 |
| ·DNA提取方法研究 | 第24页 |
| ·RNA提取方法研究 | 第24页 |
| ·ISSR遗传多样性及对甘草酸含量变异的影响研究 | 第24页 |
| ·SQS1基因序列多态性及对甘草酸含量变异的影响研究 | 第24页 |
| ·SQS基因表达量差异及对甘草酸含量变异的影响研究 | 第24页 |
| ·SQS基因时空表达差异及对甘草酸含量变异的影响研究 | 第24-25页 |
| ·研究目标和拟解决的关键问题 | 第25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 第二部分 材料与方法汇总 | 第26-58页 |
| 3 材料与方法学研究 | 第26-58页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·材料采集与处理 | 第26页 |
| ·材料分组 | 第26页 |
| ·DNA提取材料 | 第26页 |
| ·RNA提取材料 | 第26-27页 |
| ·方法学研究 | 第27-58页 |
| ·DNA提取方法研究 | 第27-32页 |
| ·RNA提取方法研究 | 第32-40页 |
| ·ISSR-PCR方法研究 | 第40-47页 |
| ·RT-PCR方法研究 | 第47-52页 |
| ·Real-Time PCR方法研究 | 第52-55页 |
| ·PCR-DNA测序方法研究 | 第55-58页 |
| 第三部分 实验结果与结论 | 第58-90页 |
| 4 遗传差异影响甘草酸含量变异—ISSR遗传多样性研究结果 | 第58-63页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-60页 |
| ·ISSR-PCR优化反应体系 | 第58-59页 |
| ·ISSR指纹图谱 | 第59-60页 |
| ·ISSR指纹图谱特征 | 第60页 |
| ·结论与讨论 | 第60-62页 |
| ·甘草群体个体间存在遗传差异 | 第60-61页 |
| ·高甘草酸含量组个体具有相近的遗传基础 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 5 SQS基因突变和杂交影响甘草酸含量变异—SQS基因序列多态性研究结果 | 第63-78页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·实验方法 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-74页 |
| ·SQS1基因cDNA全长及开放阅读框 | 第63页 |
| ·SQS1基因的各外显子定位 | 第63-66页 |
| ·引物设计 | 第66页 |
| ·SQS1部分DNA序列的扩增结果 | 第66-67页 |
| ·PCR扩增产物的序列测定 | 第67-72页 |
| ·PCR分段测序的完整性分析 | 第72-73页 |
| ·SQS1部分DNA序列特征 | 第73-74页 |
| ·结论与讨论 | 第74-77页 |
| ·10个甘草样品的SQS1基因可分为CA、AG及杂交三个核苷酸型 | 第74页 |
| ·SQS1基因的纯合和杂交引起甘草酸含量变异 | 第74-75页 |
| ·SQS1基因突变引起甘草酸含量变异 | 第75页 |
| ·关于测序时出现的问题讨论 | 第75-77页 |
| ·小结 | 第77-78页 |
| 6 SQS基因表达量差异影响甘草酸含量变异—REAL-TIME PCR研究结果 | 第78-86页 |
| ·实验材料 | 第78页 |
| ·实验方法 | 第78页 |
| ·实验结果 | 第78-82页 |
| ·引物序列 | 第78页 |
| ·Real-Time PCR标准曲线的建立 | 第78页 |
| ·Real-Time PCR扩增反应体系 | 第78页 |
| ·Real-Time PCR扩增 | 第78-79页 |
| ·相对定量PCR实验结果 | 第79-82页 |
| ·结论与讨论 | 第82-85页 |
| ·SQS1基因和甘草酸含量变异的关系更密切 | 第82页 |
| ·SQS基因的表达量差异可对甘草酸含量的变异产生影响 | 第82页 |
| ·SQS基因突变是其表达量出现差异的遗传基础 | 第82-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 7 SQS1基因表达量差异是不同部位和月份甘草酸含量变异的遗传基础—RT-PCR研究结果 | 第86-90页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86页 |
| ·实验结果 | 第86-87页 |
| ·引物序列 | 第86页 |
| ·RT-PCR扩增反应体系 | 第86页 |
| ·不同部位18s rRNA内参基因的表达 | 第86页 |
| ·叶组织中不同月份SQS1基因的表达特征 | 第86-87页 |
| ·根组织中不同月份SQS1基因的表达特征 | 第87页 |
| ·结论与讨论 | 第87-88页 |
| ·不同部位与不同月份SQS基因表达与否与甘草酸含量积累有关 | 第87-88页 |
| ·不同月份甘草主根中SQS基因表达量与甘草酸含量呈正相关趋势 | 第88页 |
| ·小结 | 第88-90页 |
| 第四部分 结论与创新 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简历 | 第98-99页 |
| 附录 | 第99-102页 |
