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异三聚体G蛋白在生长素介导的拟南芥侧根发育中的作用机理研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-8页
中英文对照词第8-15页
第一章 文献综述第15-50页
 1.G 蛋白与植物的生长发育第15-23页
   ·G 蛋白概述第15-18页
     ·G 蛋白的组成及三维结构第15-17页
     ·G 蛋白的生物学定位第17页
     ·G-蛋白的信号转导通路第17-18页
   ·植物 G-蛋白功能的研究进展第18-23页
     ·G 蛋白在脱落酸和生长素信号转导途径中的作用第18-20页
       ·G 蛋白在脱落酸(Abscisic acid, ABA)信号转导途径中的作用第18-19页
       ·G 蛋白在生长素(Auxin)信号转导中的作用第19-20页
     ·G 蛋白在光信号转导途径中的作用第20页
     ·G 蛋白在抗真菌防御机制中的作用第20页
     ·G 蛋白在调控细胞分裂周期进程中的作用第20-21页
     ·G 蛋白在植物的生长发育过程中的作用第21-23页
       ·G 蛋白与植物种子的萌发第21页
       ·G 蛋白在根系生长发育中的作用第21-22页
       ·G 蛋白在茎叶生长发育中的作用第22页
       ·G 蛋白在植物生殖生长中的作用第22-23页
 2 生长素的极性运输与信号转导第23-30页
   ·植物体内的生长素极性运输第23-26页
     ·AUX 蛋白与生长素的极性运输第25页
     ·PIN 蛋白与生长素的极性运输第25-26页
     ·影响生长素极性运输的其它因子第26页
   ·植物体内的生长素信号转导第26-30页
     ·生长素受体第27-28页
     ·ARFs 蛋白和Aux/IAA 蛋白第28-29页
     ·SCF~(TIR1)泛素途径第29-30页
 3. 侧根发育研究进展第30-37页
   ·侧根发育过程第30-33页
     ·侧根原基的发生第31-32页
     ·侧根的发生位置第32-33页
   ·影响侧根发育的因素第33-37页
     ·营养元素对侧根发育的影响第33页
     ·激素对侧根发育的调节第33-37页
       ·生长素与侧根发育第33-36页
       ·其它激素与侧根发育第36-37页
 4. 本研究的目的及研究内容第37-38页
 参考文献第38-50页
第二章 G 蛋白对生长素介导的拟南芥侧根发育的影响第50-68页
 1 引言第50页
 2 材料与方法第50-55页
   ·植物材料及培养条件第50-51页
   ·突变体的鉴定第51-52页
   ·侧根原基发生的组织学观察第52-53页
   ·根冠比的测定第53页
   ·生长素处理及根系生长发育指标的测定第53-54页
     ·生长素及生长素运输抑制剂处理第53-54页
     ·无菌苗的根系生长发育指标测定第54页
   ·去茎尖、根尖实验第54页
     ·去茎尖处理第54页
     ·去根尖处理第54页
   ·根系生长素含量的测定第54-55页
 3 结果与分析第55-64页
   ·拟南芥 G 蛋白 α 亚基和 β 亚基缺失突变体的 RT-PCR 鉴定第55页
   ·G 蛋白突变体的根系发育特征第55-56页
   ·生长素及生长素运输抑制剂对拟南芥G 蛋白突变体根系发育的影响第56-59页
     ·生长素及生长素运输抑制剂对主根伸长的影响第56-58页
     ·生长素及生长素运输抑制剂对侧根发育的影响第58-59页
   ·不同基因型侧根原基发生过程的形态学特征分析第59-61页
     ·不同基因型幼苗的侧根发生过程分析第59-60页
     ·不同基因型的侧根原基发育时期分布特征比较第60-61页
   ·根尖、茎尖端的生长素极性运输对侧根发生的影响第61-63页
     ·茎端生长素的向顶运输对侧根发生的影响第62页
     ·根端生长素的向基运输对侧根发生的影响第62-63页
   ·不同基因型拟南芥根部生长素含量比较第63-64页
 4 讨论第64-65页
   ·茎端合成的生长素是促进 agb1-2 侧根大量发生的主要因素第64页
   ·根部生长素的向基运输是影响 G-蛋白突变体侧根发生差异的主要原因第64页
   ·GPA1 突变影响主根伸长生长对生长素的敏感性第64-65页
 参考文献第65-68页
第三章 G-蛋白过表达植株的根系发育特征第68-84页
 1 引言第68页
 2 材料与方法第68-71页
   ·实验材料第68页
   ·菌株、载体及生化试剂第68-69页
   ·实验方法第69-71页
     ·拟南芥 GPA1、AGB1 基因的克隆与转化第69-70页
     ·转基因拟南芥种子的抗性筛选及鉴定第70-71页
     ·转基因植株中融合蛋白的组织水平定位第71页
     ·转基因植株中 GPA1/AGB1 基因的半定量 RT-PCR 分析第71页
     ·转基因植株侧根原基的观察与计数第71页
     ·转基因植株根系生长发育指标的测定第71页
 3 结果与分析第71-81页
   ·转基因植株的获得第71-75页
     ·GPA1 基因和 AGB1 基因全长 cDNA 序列的获得第71-72页
     ·GPA1 和 AGB1 基因的 TOPO 克隆与鉴定第72-73页
     ·农杆菌介导转化拟南芥植株第73页
     ·转基因植株的筛选第73-75页
   ·转基因植株根部的 GPA1/AGB1-GFP 融合蛋白的表达定位第75-77页
     ·转基因植株根尖部位的 GFP 融合蛋白定位第75-76页
     ·转基因植株幼根成熟区中的 GFP 定位第76页
     ·GPA1/AGB1-GFP 在新形成侧根中的表达定位第76-77页
   ·转基因植株的叶片及根系表型特征第77页
   ·转基因植株的根系发育特征第77-81页
     ·转基因植株的根系发育第77-78页
     ·生长素及生长素运输抑制剂对转基因植株侧根发育的影响第78-81页
 4 讨论第81-83页
   ·AGB1 负调节拟南芥侧根发育过程第81-82页
   ·AGB1 通过抑制生长素的极性运输途径负调节侧根发育第82-83页
 参考文献第83-84页
第四章 G 蛋白在拟南芥悬浮细胞分裂和伸长中的作用第84-103页
 1 引言第84-85页
 2 材料与方法第85-89页
   ·悬浮培养细胞系的建立第85-86页
   ·悬浮细胞研究方法第86-87页
     ·细胞处理第86页
     ·鲜重的称量第86页
     ·显微观察第86页
     ·细胞分裂指数的荧光观察第86-87页
   ·悬浮细胞的Western-blot 分析第87-88页
     ·膜蛋白的提取第87页
     ·蛋白质浓度测定及SDS-PAGE第87页
     ·Western Blotting第87-88页
   ·过表达悬浮细胞系的构建第88页
     ·质粒构建第88页
     ·农杆菌的转化培养第88页
     ·农杆菌介导的细胞转化第88页
     ·转化细胞的GFP-PCR 鉴定第88页
   ·悬浮细胞中相关基因的半定量RT-PCR第88-89页
 3 结果与分析第89-98页
   ·2,4-D 和 NAA 在拟南芥 Col 悬浮细胞中的作用第89-93页
     ·2,4-D 和 NAA 对拟南芥悬浮细胞生长发育的影响第89-90页
     ·2,4-D 和 NAA 对 Col 悬浮细胞分裂的影响第90-92页
     ·2,4-D 和 NAA 对 Col 悬浮细胞伸长的影响第92-93页
   ·2,4-D 和 NAA 处理 Col 细胞中 GPA1 的表达量变化第93页
   ·过表达细胞系的构建及鉴定第93-94页
   ·过表达悬浮细胞系中融合蛋白的荧光定位第94-95页
   ·突变体、野生型、过表达悬浮细胞的形态特征第95页
   ·不同基因型细胞对2,4-D 和NAA 处理的响应分析第95-98页
     ·不同基因型细胞对 NAA 诱导伸胞伸长的响应第95-97页
     ·不同基因型细胞对 2,4-D 诱导的细胞分裂的响应第97-98页
 4 讨论第98-100页
   ·AGB1的突变促进了悬浮细胞中NAA的极性输出过程第98-100页
   ·GPA1对细胞分裂过程具有促进作用第100页
 参考文献第100-103页
第五章 G 蛋白在生长素调节侧根发育过程中的作用机理第103-111页
 1 引言第103页
 2 材料与方法第103-105页
   ·植物材料第103页
   ·种子的无菌处理与萌发第103-104页
   ·生长素处理设置第104页
   ·根系生长发育指标的测定第104页
   ·根尖的重力刺激响应第104页
   ·Real-time PCR第104-105页
 3 结果与分析第105-108页
   ·G 蛋白突变体及过表达植株的根系发育对 2,4-D 和 NAA 处理的响应第105-106页
   ·不同基因型的根尖向重性反应第106-107页
   ·AGB1负调节生长素介导侧根发育过程的分子机制探讨第107-108页
     ·生长素极性输出蛋白基因 PIN1 在不同基因型根系中 mRNA 水平的表达第107页
     ·周期素基因AtCYCD4;1在不同基因型根系中mRNA水平的表达第107-108页
 4 讨论第108-109页
 参考文献第109-111页
第六章 结论与展望第111-115页
 1. 结论第111-113页
 2. 展望第113-115页
附录第115-129页
 附录一 G-蛋白对拟南芥其它生长发育过程的调节第115-122页
 附录二第122-129页
致谢第129-130页
攻读学位期间发表的主要学术论文目录第130-131页

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