| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-18页 |
| ·鸡球虫病的研究现状 | 第8-12页 |
| ·鸡球虫的现代研究 | 第8-9页 |
| ·球虫的体外培养的研究现状 | 第9页 |
| ·球虫的抗原分析和免疫原性的研究现状 | 第9-10页 |
| ·球虫疫苗的研究现状 | 第10-12页 |
| ·基因工程抗体的研究现状 | 第12-18页 |
| ·抗体的分子结构 | 第13页 |
| ·抗体分子的基本结构 | 第13-14页 |
| ·抗体分子的功能区结构 | 第14-16页 |
| ·基因工程抗体的研究进展 | 第16-18页 |
| 2 材料与仪器 | 第18-22页 |
| ·单卵囊分离及PCR鉴定试验所用主要试剂 | 第18页 |
| ·提取裂殖子试验所需主要化学试剂 | 第18页 |
| ·抗原制备及ELISA试验所需主要化学试剂 | 第18-19页 |
| ·总RNA提取及反转录所需主要试剂 | 第19页 |
| ·全套VH和VL基因的扩增与鉴定所需试剂 | 第19页 |
| ·引物设计与合成 | 第19-20页 |
| ·球虫虫种PCR鉴定所用引物 | 第19-20页 |
| ·扩增轻链重链可变区抗体库所需引物 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-22页 |
| 3 方法与程序 | 第22-34页 |
| ·堆型艾美耳球虫单卵囊分离及鉴定 | 第22-25页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·试验虫株及卵囊的培养 | 第22页 |
| ·单卵囊的分离 | 第22页 |
| ·继代增殖 | 第22-23页 |
| ·虫种的常规鉴定 | 第23页 |
| ·球虫虫种的PCR鉴定 | 第23-25页 |
| ·裂殖子抗原提取方法的比较试验及可溶性抗原的制备 | 第25-26页 |
| ·试验动物 | 第25页 |
| ·提取裂殖子最佳时间的确定 | 第25页 |
| ·四种分离裂殖子方法的比较试验 | 第25-26页 |
| ·可溶性抗原的制备 | 第26页 |
| ·抗原成分的分析 | 第26页 |
| ·动物免疫及抗体效价的测定 | 第26-27页 |
| ·动物免疫 | 第26-27页 |
| ·阳性血清效价的测定 | 第27页 |
| ·免疫小鼠脾脏总RNA的提取和cDNA的合成 | 第27-29页 |
| ·小鼠脾脏总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·cDNA第1链的合成 | 第28-29页 |
| ·全套VH和VL基因的扩增 | 第29-31页 |
| ·以逆转录合成的cDNA第1链为模板,分别进行全套VHl和VL基因的扩增 | 第29页 |
| ·VH的PCR扩增 | 第29页 |
| ·VL的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·从琼脂糖胶中回收DNA片段 | 第30-31页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第31-34页 |
| ·PCR产物与PGM-T载体的连接 | 第31页 |
| ·用氯化钙法制备感受态细胞 | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第32页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第32-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-42页 |
| ·单卵囊分离结果 | 第34页 |
| ·虫种常规鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·艾美耳球虫卵囊基因组DNA的提取 | 第35页 |
| ·PCR反应体系的结果 | 第35-36页 |
| ·提取裂殖子的最佳时间 | 第36页 |
| ·最优化提取裂殖子方案 | 第36-37页 |
| ·抗原浓度测定结果 | 第37页 |
| ·抗原分析 | 第37-38页 |
| ·免疫鼠血清效价测定 | 第38页 |
| ·测定总RNA样品在260nm和280nm的吸收值 | 第38页 |
| ·轻链、重链可变区PCR结果检测 | 第38-39页 |
| ·轻链可变区基因的重组质粒酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重链可变区基因的重组质粒酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·轻链、重链可变区基因测序结果及序列分析 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-45页 |
| 6 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 附录A 主要试剂的配制 | 第52-54页 |
| 附录B | 第54-55页 |
| 附录C | 第55-58页 |
| 附录D | 第58-62页 |
| 附录E 重链、轻链可变区测序图 | 第62-73页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第73-74页 |
| 作者简历 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 附 发表论文 | 第76-80页 |