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水稻抗病基因Xa3/Xa26家族的表达和生化分析

摘要第1-9页
ABSTRACT第9-11页
1 文献综述第11-36页
   ·抗病基因的结构和功能第11-13页
     ·抗病基因的作用机理第11页
     ·抗病基因的分类第11-13页
   ·水稻抗白叶枯病的分子基础第13-16页
     ·抗白叶枯病基因的分离和克隆第13-14页
     ·Xa3/Xa26基因的克隆和基因家族第14-16页
   ·抗病基因家族及其演化第16-18页
     ·抗病基因家族的特点第16-17页
     ·抗病基因家族的演化过程第17-18页
     ·Xa3/Xa26基因家族的进化第18页
   ·植物受体激酶的结构和功能第18-23页
     ·植物受体激酶的结构第19-21页
     ·激酶结构域的特点第21-22页
     ·植物受体激酶的功能第22-23页
   ·植物受体激酶的化学性质第23-26页
     ·植物受体激酶形成信号复合体第23-24页
     ·植物受体激酶的自磷酸化现象第24-25页
     ·植物受体激酶的糖基化现象第25-26页
   ·植物受体激酶介导的信号传导途径第26-29页
     ·CLAVATA1介导的信号传导途径第26-27页
     ·SRK介导的信号传导途径第27页
     ·Pto介导的信号传导途径第27-28页
     ·FLS2介导的信号传导途径第28-29页
   ·融合蛋白的表达第29-31页
     ·融合蛋白的原核表达第29-30页
     ·融合蛋白的真核表达第30-31页
   ·生物质谱技术的应用第31-34页
     ·生物质谱技术的原理第31-32页
     ·生物质谱技术的分类第32-33页
       ·电喷雾质谱技术第32页
       ·基质辅助激光解吸附质谱技术第32页
       ·快原子轰击质谱技术第32-33页
       ·同位素质谱第33页
     ·生物质谱技术在蛋白质分析中的应用第33-34页
   ·酵母双杂交系统的发展和应用第34-36页
2 研究目的和意义第36-37页
3 材料和方法第37-48页
   ·总RNA的抽提第37页
   ·RT-PCR(Reverse transcription-PCR)分析第37-39页
   ·融合蛋白的原核表达第39-40页
     ·表达载体的构建第39-40页
     ·融合蛋白的表达第40页
     ·融合蛋白的纯化第40页
   ·蛋白激酶自磷酸化分析第40-41页
   ·毕赤酵母表达融合蛋白第41-42页
     ·酵母表达载体的构建第41页
     ·酵母表达融合蛋白第41-42页
     ·酵母表达蛋白的浓缩第42页
   ·Western-blot分析第42-43页
     ·转膜及染色第42-43页
     ·封闭滤膜及抗体与靶蛋白的结合第43页
     ·显色第43页
   ·糖基化位点的质谱鉴定第43-44页
     ·糖蛋白的胶内去糖基化以及酶解第43页
     ·糖基化位点的质谱分析第43-44页
   ·酵母双杂交分析第44-48页
     ·酵母双杂交载体的构建第44-46页
     ·检测目标蛋白之间是否互作第46-48页
4 结果和分析第48-60页
   ·Xa3/Xa26基因家族成员的表达模式第48-50页
   ·TRka基因区段融合蛋白(TRKaP),Xa3/Xa26基因LRR区(Xa3L/Xa26L)和激酶区融合蛋白(Xa3K/Xa26K)的原核表达第50-53页
   ·Xa3K/Xa26K没有自磷酸化现象第53页
   ·毕赤酵母表达XA3/XA26融合蛋白第53-56页
   ·利用质谱技术分析XA3/XA26的糖基化位点第56-59页
   ·XA3/XA26与MRKa,MRKc及其本身的互作关系第59-60页
5 讨论第60-68页
   ·Xa3/Xa26基因家族成员的表达分析第60-61页
   ·优化原核表达融合蛋白的探讨第61-63页
     ·选择合适的pET载体第61页
     ·蛋白表达过程中的调控第61-62页
     ·诱导表达过程中具体条件的优化第62页
     ·蛋白毒性对蛋白产量的影响第62-63页
   ·激酶自磷酸化现象的探讨第63-64页
   ·酵母表达融合蛋白的探讨第64-65页
   ·质谱分析激酶糖基化现象第65-66页
   ·激酶信号传导途径的探讨第66-68页
参考文献第68-82页
致谢第82页

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