摘要 | 第1-9页 |
ABSTRACT | 第9-11页 |
1 文献综述 | 第11-36页 |
·抗病基因的结构和功能 | 第11-13页 |
·抗病基因的作用机理 | 第11页 |
·抗病基因的分类 | 第11-13页 |
·水稻抗白叶枯病的分子基础 | 第13-16页 |
·抗白叶枯病基因的分离和克隆 | 第13-14页 |
·Xa3/Xa26基因的克隆和基因家族 | 第14-16页 |
·抗病基因家族及其演化 | 第16-18页 |
·抗病基因家族的特点 | 第16-17页 |
·抗病基因家族的演化过程 | 第17-18页 |
·Xa3/Xa26基因家族的进化 | 第18页 |
·植物受体激酶的结构和功能 | 第18-23页 |
·植物受体激酶的结构 | 第19-21页 |
·激酶结构域的特点 | 第21-22页 |
·植物受体激酶的功能 | 第22-23页 |
·植物受体激酶的化学性质 | 第23-26页 |
·植物受体激酶形成信号复合体 | 第23-24页 |
·植物受体激酶的自磷酸化现象 | 第24-25页 |
·植物受体激酶的糖基化现象 | 第25-26页 |
·植物受体激酶介导的信号传导途径 | 第26-29页 |
·CLAVATA1介导的信号传导途径 | 第26-27页 |
·SRK介导的信号传导途径 | 第27页 |
·Pto介导的信号传导途径 | 第27-28页 |
·FLS2介导的信号传导途径 | 第28-29页 |
·融合蛋白的表达 | 第29-31页 |
·融合蛋白的原核表达 | 第29-30页 |
·融合蛋白的真核表达 | 第30-31页 |
·生物质谱技术的应用 | 第31-34页 |
·生物质谱技术的原理 | 第31-32页 |
·生物质谱技术的分类 | 第32-33页 |
·电喷雾质谱技术 | 第32页 |
·基质辅助激光解吸附质谱技术 | 第32页 |
·快原子轰击质谱技术 | 第32-33页 |
·同位素质谱 | 第33页 |
·生物质谱技术在蛋白质分析中的应用 | 第33-34页 |
·酵母双杂交系统的发展和应用 | 第34-36页 |
2 研究目的和意义 | 第36-37页 |
3 材料和方法 | 第37-48页 |
·总RNA的抽提 | 第37页 |
·RT-PCR(Reverse transcription-PCR)分析 | 第37-39页 |
·融合蛋白的原核表达 | 第39-40页 |
·表达载体的构建 | 第39-40页 |
·融合蛋白的表达 | 第40页 |
·融合蛋白的纯化 | 第40页 |
·蛋白激酶自磷酸化分析 | 第40-41页 |
·毕赤酵母表达融合蛋白 | 第41-42页 |
·酵母表达载体的构建 | 第41页 |
·酵母表达融合蛋白 | 第41-42页 |
·酵母表达蛋白的浓缩 | 第42页 |
·Western-blot分析 | 第42-43页 |
·转膜及染色 | 第42-43页 |
·封闭滤膜及抗体与靶蛋白的结合 | 第43页 |
·显色 | 第43页 |
·糖基化位点的质谱鉴定 | 第43-44页 |
·糖蛋白的胶内去糖基化以及酶解 | 第43页 |
·糖基化位点的质谱分析 | 第43-44页 |
·酵母双杂交分析 | 第44-48页 |
·酵母双杂交载体的构建 | 第44-46页 |
·检测目标蛋白之间是否互作 | 第46-48页 |
4 结果和分析 | 第48-60页 |
·Xa3/Xa26基因家族成员的表达模式 | 第48-50页 |
·TRka基因区段融合蛋白(TRKaP),Xa3/Xa26基因LRR区(Xa3L/Xa26L)和激酶区融合蛋白(Xa3K/Xa26K)的原核表达 | 第50-53页 |
·Xa3K/Xa26K没有自磷酸化现象 | 第53页 |
·毕赤酵母表达XA3/XA26融合蛋白 | 第53-56页 |
·利用质谱技术分析XA3/XA26的糖基化位点 | 第56-59页 |
·XA3/XA26与MRKa,MRKc及其本身的互作关系 | 第59-60页 |
5 讨论 | 第60-68页 |
·Xa3/Xa26基因家族成员的表达分析 | 第60-61页 |
·优化原核表达融合蛋白的探讨 | 第61-63页 |
·选择合适的pET载体 | 第61页 |
·蛋白表达过程中的调控 | 第61-62页 |
·诱导表达过程中具体条件的优化 | 第62页 |
·蛋白毒性对蛋白产量的影响 | 第62-63页 |
·激酶自磷酸化现象的探讨 | 第63-64页 |
·酵母表达融合蛋白的探讨 | 第64-65页 |
·质谱分析激酶糖基化现象 | 第65-66页 |
·激酶信号传导途径的探讨 | 第66-68页 |
参考文献 | 第68-82页 |
致谢 | 第82页 |