| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第一章 文献综述及前言 | 第16-40页 |
| 1 β-氨基丁酸诱导植物抗病作用的研究进展 | 第16-23页 |
| ·BABA诱导植物的抗病作用 | 第16-18页 |
| ·BABA的广谱诱抗活性 | 第16-17页 |
| ·BABA对植物线虫的诱抗活性 | 第17-18页 |
| ·BABA与其他化合物的互作增效作用 | 第18页 |
| ·BABA的使用方法及在植株体内的吸收、运转和代谢 | 第18-20页 |
| ·BABA处理时间、方式及有效使用浓度 | 第18-19页 |
| ·植物组织对BABA的吸收 | 第19页 |
| ·BABA的运转 | 第19-20页 |
| ·BABA的新陈代谢 | 第20页 |
| ·BABA诱导植物抗病的生理、生化作用机制 | 第20-22页 |
| ·生理屏障的产生 | 第20页 |
| ·过敏反应和活性氧物质的生成 | 第20-21页 |
| ·病程相关蛋白的积累 | 第21页 |
| ·植物保卫素的产生 | 第21-22页 |
| ·抗病信号传导途径 | 第22页 |
| ·BABA结构与功能的关系 | 第22-23页 |
| 2 未知基因的鉴定方法 | 第23-32页 |
| ·mRNA差异显示技术 | 第23-24页 |
| ·代表性序列差异分析 | 第24-25页 |
| ·抑制性差减杂交 | 第25-26页 |
| ·基因表达系列分析 | 第26-27页 |
| ·基因鉴定集成法 | 第27-28页 |
| ·cDNA微阵列和基因芯片 | 第28页 |
| ·cDNA-AFLP技术及其研究进展 | 第28-32页 |
| ·cDNA-AFLP技术的基本原理 | 第29页 |
| ·cDNA-AFLP的主要过程 | 第29-31页 |
| ·cDNA-AFLP技术的特点评价 | 第31-32页 |
| ·cDNA-AFLP技术的应用现状 | 第32页 |
| 3 植物细胞Ca~(2+)-ATPase及其在逆境信号转导中的作用 | 第32-38页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase在Ca~(2+)信号转导中的作用 | 第32-33页 |
| ·Ca~(2+)信号转导的分子途径 | 第32-33页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase在Ca~(2+)信号转导中的作用 | 第33页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的理化特性 | 第33-35页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的类型 | 第33页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的亚细胞定位 | 第33-34页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的结构 | 第34页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的分子量 | 第34页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的生化特性 | 第34-35页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的激活与抑制 | 第35页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的逆境应答 | 第35-36页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·存在问题与展望 | 第37-38页 |
| 4 本研究的目的意义与技术路线 | 第38-40页 |
| ·目的意义 | 第38-39页 |
| ·技术路线 | 第39-40页 |
| 第二章 应用cDNA—AFLP技术分离番茄应答BABA诱导的植物抗病相关基因 | 第40-60页 |
| 1 试验材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·主要生化试剂 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-47页 |
| ·β-氨基丁酸诱导处理 | 第41页 |
| ·育苗 | 第41页 |
| ·BABA使用浓度的确定 | 第41页 |
| ·取样 | 第41页 |
| ·RNA提取 | 第41-42页 |
| ·cDNA的合成 | 第42-43页 |
| ·无RNase的DNase处理 | 第42页 |
| ·cDNA的合成 | 第42-43页 |
| ·cDNA-AFLP | 第43-46页 |
| ·模板制备 | 第44页 |
| ·扩增反应 | 第44-46页 |
| ·差异表达片段回收、克隆与测序 | 第46-47页 |
| ·差异表达片段的回收 | 第46页 |
| ·回收片段的连接转化 | 第46-47页 |
| ·阳性(白斑)菌落PCR扩增鉴定与摇菌培养 | 第47页 |
| ·阳性克隆的序列测定 | 第47页 |
| ·生物信息学分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·植物的培育 | 第47-48页 |
| ·BABA使用浓度的确定 | 第48页 |
| ·RNA的提取 | 第48页 |
| ·双链cDNA的合成、酶切连接和预扩增结果 | 第48-49页 |
| ·cDNA-AFLP转录图谱 | 第49-51页 |
| ·受BABA诱导转录上调基因片段BIF的分析 | 第51-54页 |
| ·BIF的序列测定 | 第51-52页 |
| ·BIF序列同源性分析 | 第52-53页 |
| ·BIF序列的表达模式 | 第53-54页 |
| ·受BABA诱导转录下调基因片段的分析 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| ·cDNA-AFLP技术的利用 | 第55页 |
| ·序列BIF17与BABA诱导抗病性 | 第55-56页 |
| ·对BABA诱导植物根部抗病分子机理的探讨 | 第56-59页 |
| 5 小结 | 第59页 |
| 6 图版 | 第59-60页 |
| 第三章 步进PCR结合RACE方法克隆PM型Ca~(2+)—ATPase基因全长cDNA | 第60-83页 |
| 1 试验材料 | 第61页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·主要生化试剂 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61-66页 |
| ·靶标基因片段BIF17的序列分析 | 第61页 |
| ·RNA提取 | 第61页 |
| ·步进PCR同源克隆Ca~(2+)-ATPase基因 | 第61-63页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第61-62页 |
| ·PCR扩增 | 第62-63页 |
| ·RACE获得全长cDNA | 第63-66页 |
| ·引物设计: | 第63页 |
| ·3′-RACE | 第63-64页 |
| ·5′-RACE | 第64-66页 |
| ·目的片段回收、克隆与测序 | 第66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-80页 |
| ·靶标基因片段BIF17的序列分析 | 第66-69页 |
| ·序列组成 | 第66页 |
| ·序列分析 | 第66-68页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase基因分子系统发育分析 | 第68页 |
| ·靶标基因BIF17同源基因亚族序列分析 | 第68-69页 |
| ·步进PCR克隆Ca~(2+)-ATPase基因 | 第69-73页 |
| ·第一步同源克隆 | 第69-71页 |
| ·第二步同源克隆 | 第71-73页 |
| ·RACE法获得cDNA全长序列3’、5’末端 | 第73-76页 |
| ·3’RACE | 第73-74页 |
| ·5’RACE | 第74-76页 |
| ·序列拼接 | 第76-78页 |
| ·全长序列的验证 | 第78-80页 |
| ·同源基因的搜索比对 | 第78-79页 |
| ·全长序列开放式阅读框(ORF)分析 | 第79页 |
| ·试验验证 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase在植物逆境信号转导中的重要作用 | 第80-81页 |
| ·对新基因克隆策略的思考 | 第81-82页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase的保守性 | 第82页 |
| 5 小结 | 第82-83页 |
| 第四章 Ca~(2+)-ATPase基因表达研究及功能预测 | 第83-103页 |
| 第一节 Ca~(2+)-ATPase基因受BABA诱导表达的时空规律 | 第83-90页 |
| 1 试验材料 | 第83页 |
| ·植物材料 | 第83页 |
| ·主要生化试剂 | 第83页 |
| 2 方法 | 第83-85页 |
| ·不同RNA提取试剂对番茄成熟组织提取效果研究 | 第83-84页 |
| ·RNA提取方法 | 第83页 |
| ·RNA质量检测 | 第83-84页 |
| ·反转录成cDNA | 第84页 |
| ·PCR进行半定量内参检测 | 第84页 |
| ·Northern blotting | 第84-85页 |
| ·育苗以及取样 | 第84页 |
| ·RNA提取 | 第84页 |
| ·甲醛凝胶电泳 | 第84页 |
| ·转膜 | 第84页 |
| ·分子杂交 | 第84-85页 |
| ·洗膜 | 第85页 |
| ·分子成像 | 第85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-89页 |
| ·RNA提取方法研究 | 第85-88页 |
| ·RNA样品的凝胶电泳分析 | 第86页 |
| ·RNA样品的紫外扫描分析 | 第86-87页 |
| ·RNA样品的产量比较 | 第87页 |
| ·RT-PCR半定量内参检测 | 第87-88页 |
| ·Northern blotting | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-90页 |
| ·RNA提取 | 第89页 |
| ·Northern杂交 | 第89-90页 |
| 第二节 Ca~(2+)-ATPase基因的功能预测 | 第90-102页 |
| 1 方法 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-102页 |
| ·蛋白的理化性质分析 | 第90-92页 |
| ·ProtParam | 第90-92页 |
| ·ProtScale | 第92页 |
| ·Interpro搜索对序列进行整体评价 | 第92-93页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase蛋白二、三级结构预测 | 第93-98页 |
| ·Motif预测 | 第93-94页 |
| ·结构域分析 | 第94-97页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase蛋白跨膜结构预测 | 第97-98页 |
| ·Ca~(2+)-ATPase蛋白三维模型预测 | 第98-99页 |
| ·基因代谢途径分析 | 第99-100页 |
| ·分子系统发育分析 | 第100-102页 |
| 3 讨论 | 第102页 |
| 本章小结 | 第102-103页 |
| 第五章 番茄应答BABA诱导全长cDNA文库的构建 | 第103-113页 |
| 1 试验材料 | 第104页 |
| ·植物材料 | 第104页 |
| ·主要生化试剂 | 第104页 |
| 2 方法 | 第104-109页 |
| ·育苗以及取样方法 | 第104页 |
| ·RNA的大量提取法 | 第104页 |
| ·mRNA分离与提纯 | 第104-105页 |
| ·cDNA文库构建 | 第105-109页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第105页 |
| ·引物延伸法合成cDNA第二链 | 第105-106页 |
| ·蛋白酶消化 | 第106页 |
| ·SfI酶切 | 第106页 |
| ·用CHROMA SPINTM-400进行cDNA大小片段分级 | 第106-107页 |
| ·ds cDNA与pDNR-LIB载体的连接 | 第107-108页 |
| ·重组质粒转化进E.coli | 第108页 |
| ·测定质粒文库的滴度 | 第108页 |
| ·文库的扩增 | 第108-109页 |
| 3 结果与分析 | 第109-110页 |
| ·总RNA提取与mRNA纯化 | 第109页 |
| ·单链和双链cDNA的合成 | 第109-110页 |
| ·双链cDNA的分级 | 第110页 |
| ·cDNA与载体的连接转化 | 第110页 |
| ·cDNA文库滴度测定与文库扩增 | 第110页 |
| 4 讨论 | 第110-111页 |
| ·cDNA文库的质量及其可能影响因素 | 第110-111页 |
| 5 小结 | 第111-112页 |
| 6 图版 | 第112-113页 |
| 第六章 Ca~(2+)-ATPase基因在低温锻炼柑橘中的表达分析 | 第113-117页 |
| 1 试验材料 | 第113页 |
| ·植物材料 | 第113页 |
| ·主要生化试剂 | 第113页 |
| 2 方法 | 第113-115页 |
| ·材料处理 | 第113页 |
| ·采样 | 第113页 |
| ·总RNA提取 | 第113-114页 |
| ·单链cDNA的合成 | 第114页 |
| ·半定量内参引物扩增 | 第114页 |
| ·PCR扩增 | 第114-115页 |
| 3 结果与分析 | 第115页 |
| 4 讨论 | 第115-116页 |
| 5 小结 | 第116-117页 |
| 结论 | 第117-118页 |
| 论文创新点 | 第118-119页 |
| 下一步工作设想 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-128页 |
| 附录 | 第128-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
