| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第14-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-48页 |
| 1 植物多基因转化方法 | 第18-29页 |
| ·杂交方法 | 第18-19页 |
| ·重复转化方法 | 第19-20页 |
| ·共转化方法 | 第20-22页 |
| ·多质粒共转化 | 第20-21页 |
| ·单质粒共转化 | 第21-22页 |
| ·利用叶绿体转化技术进行多基因转化 | 第22-24页 |
| ·利用内部核糖体进入位点进行多基因转化 | 第24-25页 |
| ·利用多聚蛋白途径进行多基因转化 | 第25-29页 |
| ·以蛋白水解酶识别位点融合多基因 | 第25-26页 |
| ·以口蹄疫病毒2A序列融合多基因 | 第26-29页 |
| 2 本研究中相关的功能基因及其在植物基因工程中的应用 | 第29-41页 |
| ·甜菜碱在提高植物抗非生物胁迫中的作用 | 第29-34页 |
| ·甜菜碱在植物中的生物合成途径 | 第30-31页 |
| ·甜菜碱的生理功能 | 第31-32页 |
| ·甜菜碱提高植物抗非生物胁迫能力 | 第32-34页 |
| ·DREB转录因子 | 第34-37页 |
| ·DREB转录因子的克隆 | 第34-36页 |
| ·DREB转录因子的表达特点 | 第36-37页 |
| ·转DREB基因提高植物抗逆性 | 第37页 |
| ·IRT基因 | 第37-40页 |
| ·植物在缺铁条件下两种铁吸收的机制 | 第37-39页 |
| ·IRT的功能、表达特点及应用 | 第39-40页 |
| ·rol基因 | 第40-41页 |
| ·转rol基因对植物生长发育的影响 | 第40-41页 |
| ·rol基因在园艺植物基因工程上的应用 | 第41页 |
| 3 果树基因工程研究进展 | 第41-48页 |
| ·果树基因组学研究 | 第42-43页 |
| ·果树转基因研究 | 第43-47页 |
| ·果树转基因研究存在的问题 | 第47-48页 |
| 第二章 盐地碱蓬(Suaeda salsa)甜菜碱合成酶基因的克隆及其融合基因中间载体的构建 | 第48-72页 |
| 1 材料与方法 | 第49-60页 |
| ·植物材料及培养条件 | 第49页 |
| ·菌株、载体及试剂 | 第49页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第49-51页 |
| ·方法 | 第51-60页 |
| ·盐地碱蓬总RNA的提取(Trizol法) | 第51页 |
| ·cDNA合成 | 第51-52页 |
| ·引物设计 | 第52-53页 |
| ·盐地碱蓬SsCMO和SsBADH基因的PCR扩增 | 第53页 |
| ·扩增产物的回收及克隆 | 第53-54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备方法 | 第54-55页 |
| ·重组质粒的转化及阳性克隆筛选 | 第55页 |
| ·质粒提取方法 | 第55-56页 |
| ·中间载体构建 | 第56-60页 |
| ·pBluescript KS(+)载体多克隆位点改造 | 第56-58页 |
| ·双链2A序列合成 | 第58页 |
| ·中间载体鉴定及测序 | 第58-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-70页 |
| ·盐地碱蓬甜菜碱合成酶SsCMO,SsBADH基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·盐地碱蓬总RNA的提取 | 第60页 |
| ·SsCMO和SsBADH基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·中间载体的构建 | 第61-63页 |
| ·载体pBluescriptⅡKS(+)多克隆位点改造 | 第61-62页 |
| ·中间载体的构建及流程 | 第62-63页 |
| ·中间载体PCR和酶切的鉴定 | 第63-65页 |
| ·中间载体融合基因测序结果 | 第65-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 第三章 口蹄疫病毒2A序列融合甜菜碱合成酶基因酵母表达载体的构建及其在毕赤酵母中的共表达 | 第72-91页 |
| 1 材料与方法 | 第73-82页 |
| ·菌株及载体 | 第73页 |
| ·酶及试剂 | 第73-74页 |
| ·培养基及溶液配置 | 第74-75页 |
| ·方法 | 第75-82页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第75-77页 |
| ·重组酵母表达质粒YG5254线性化、回收及纯化 | 第77-78页 |
| ·酵母感受态细胞制备、转化及重组子筛选 | 第78-79页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第78页 |
| ·电击转化酵母细胞 | 第78-79页 |
| ·His~+Mut~s酵母转化子的筛选 | 第79页 |
| ·酵母诱导表达 | 第79页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定重组蛋白的表达 | 第79-80页 |
| ·蛋白质提取及CMO和BADH活性分析 | 第80-81页 |
| ·甜菜碱提取提、纯化及含量测定 | 第81-82页 |
| ·酵母抗逆性分析 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-90页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第82-84页 |
| ·酵母转化及转化子的筛选 | 第84-85页 |
| ·酵母诱导表达SDS-PAGE分析 | 第85-86页 |
| ·胆碱单加氧酶(CMO)和甜菜碱醛脱氢酶(BADH)活性测定 | 第86-87页 |
| ·甜菜碱含量测定 | 第87-88页 |
| ·重组酵母抗逆性分析 | 第88-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 第四章 农杆菌介导甜菜碱合成酶融合基因转化烟草和八棱海棠的研究 | 第91-110页 |
| 1 材料与方法 | 第92-100页 |
| ·植物材料 | 第92页 |
| ·菌株与质粒 | 第92-93页 |
| ·酶与试剂 | 第93页 |
| ·培养基与溶液配制 | 第93-94页 |
| ·方法 | 第94-100页 |
| ·植物表达载体构建 | 第94-96页 |
| ·表达载体pCAMBIA S1300-C2AB转化农杆菌 | 第96-97页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备方法(CaCl_2法) | 第96页 |
| ·质粒pcAMBIA S1300-C2AB转化农杆菌方法 | 第96-97页 |
| ·烟草和八棱海棠再生及筛选培养基潮霉素选择压的确定 | 第97页 |
| ·农杆菌介导甜菜碱合成酶融合基因转化烟草方法 | 第97-98页 |
| ·农杆菌介导的八棱海棠遗传转化方法 | 第98页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第98-99页 |
| ·转基因植株DNA提取 | 第98-99页 |
| ·PCR鉴定 | 第99页 |
| ·转基因烟草甜菜碱含量的测定 | 第99-100页 |
| ·甜菜碱纯化 | 第100页 |
| ·反相离子对色谱法测定甜菜碱含量 | 第100页 |
| ·转基因烟草的耐盐性分析 | 第100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-108页 |
| ·甜菜碱合成酶融合基因植物表达载体构建及转化农杆菌 | 第100-101页 |
| ·八棱海棠和烟草潮霉素选择压的确定 | 第101-103页 |
| ·转融合基因烟草和八棱海棠抗性植株的筛选 | 第103-104页 |
| ·转基因烟草的PCR鉴定 | 第104-106页 |
| ·转基因烟草甜菜碱含量测定 | 第106-107页 |
| ·转基因烟草耐盐性分析 | 第107-108页 |
| 3 讨论 | 第108-110页 |
| 第五章 口蹄疫病毒2A序列融合三价基因Rirol转化八棱海棠的研究 | 第110-132页 |
| 1 材料与方法 | 第111-118页 |
| ·植物材料 | 第111页 |
| ·酶与试剂 | 第111页 |
| ·溶液与培养基配制 | 第111-113页 |
| ·基因的克隆改造、三价融合基因的合成及植物表达载体构建 | 第113-114页 |
| ·基因克隆及改造 | 第113页 |
| ·三价融合基因植物表达载体构建及转化农杆菌 | 第113页 |
| ·三价融合基因转化农杆菌 | 第113-114页 |
| ·八棱海棠再生及卡那霉素Km选择压的确定 | 第114页 |
| ·八棱海棠遗传转化方法 | 第114页 |
| ·抗性植株的GUS检测 | 第114页 |
| ·抗性植株PCR检测 | 第114-116页 |
| ·DNA提取方法 | 第114-115页 |
| ·PCR扩增 | 第115-116页 |
| ·Southern杂交检测 | 第116-117页 |
| ·基因组的酶切 | 第116页 |
| ·转膜 | 第116页 |
| ·探针的标记 | 第116页 |
| ·预杂交及杂交 | 第116-117页 |
| ·洗膜 | 第117页 |
| ·杂交免疫检测 | 第117页 |
| ·转基因植株表型的初步分析 | 第117-118页 |
| ·转基因植株耐盐性分析 | 第117-118页 |
| ·转基因植株根、枝生长特性 | 第118页 |
| ·数据统计方法 | 第118页 |
| 2 结果与分析 | 第118-130页 |
| ·基因的克隆、改造及三价基因的合成 | 第118-124页 |
| ·卡那霉素选择压的确定 | 第124-125页 |
| ·抗性植株的获得 | 第125页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第125-127页 |
| ·GUS染色鉴定 | 第125-126页 |
| ·PCR鉴定 | 第126-127页 |
| ·Southern杂交鉴定 | 第127页 |
| ·转基因植株相关表型分析 | 第127-130页 |
| ·转基因植株耐盐性分析 | 第127-129页 |
| ·转基因植株的生长特性分析 | 第129-130页 |
| 3 讨论 | 第130-132页 |
| ·关于不同农杆菌菌株的转化效率 | 第130-131页 |
| ·关于2A融合多基因的遗传转化 | 第131-132页 |
| 全文结论 | 第132-134页 |
| 创新点 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-162页 |
| 博士期间发表的论文、主持或参加的科研项目 | 第162-164页 |
| 致谢 | 第164页 |
