| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-36页 |
| 一、 X-连锁的淋巴增生综合征基因产物 SAP | 第16-29页 |
| 1. XLP 的遗传学研究 | 第17-19页 |
| 2. SAP 在 T 细胞中与 SLAM 相结合 | 第19-21页 |
| 3. SLAM 家族受体的功能 | 第21-23页 |
| 4. SAP作为抑制者还是连接者 | 第23-26页 |
| 5. SAP缺陷型小鼠给我们的启示 | 第26-27页 |
| 6. SAP 类似的接头蛋白 EAT2 | 第27-28页 |
| 7. SAP 及XLP 留下的疑问 | 第28-29页 |
| 二、鸟苷转换因子PIX | 第29-36页 |
| 1. Rho家族鸟苷酸酶 | 第29-30页 |
| 2. PIX家族成员的发现及其鸟苷转换活性 | 第30-31页 |
| 3. PIX-PAK-GIT复合物在细胞黏附中的功能 | 第31-33页 |
| 4. PIX-PAK-Cdc42/Rac在趋化现象中的作用 | 第33-35页 |
| 5. PIX 介导 PAK 被招募到免疫突触中 | 第35-36页 |
| 第二章 实验材料及仪器 | 第36-44页 |
| 一、 主要化学试剂及实验材料 | 第36-37页 |
| 二、 抗体 | 第37页 |
| 三、 引物、载体、菌株和细胞株 | 第37-42页 |
| 四、 主要仪器 | 第42-44页 |
| 第三章 实验方法 | 第44-63页 |
| 一、 质粒构建 | 第44-47页 |
| 二、 酵母双杂交筛选 SAP 结合蛋白 | 第47-51页 |
| 三、 Jurkat-HA-SAP 稳定表达细胞株的建立 | 第51-53页 |
| 四、 报告基因系统检测 SAP 在 NFkB，p53 和 AP-1 信号通路中的作用 | 第53-57页 |
| 五、 NFAT 报告基因系统检测 SAP 在 T 细胞活化中的作用 | 第57-59页 |
| 六、 体外激酶磷酸化试验 | 第59页 |
| 七、 His-SAP, GST-PIX-SH3, GST-Fyn-SH3 重组蛋白的表达及纯化 | 第59-61页 |
| 八、 荧光能量共振转移试验 | 第61-63页 |
| 第四章 实验结果 | 第63-100页 |
| 一、 SAP 与PIX 在T 细胞中相互作用 | 第63-67页 |
| 1. 用酵母双杂交系统筛选与 SAP 相结合的蛋白 | 第63-64页 |
| 2. SAP 与PIX 在哺乳动物细胞中相互作用 | 第64-65页 |
| 3. SAP 与T 细胞内源的PIX 相互作用 | 第65-66页 |
| 4. EAT2 与PIX 无相互作用 | 第66-67页 |
| 二、 SAP 蛋白的C 末端介导了SAP 与PIX 的相互作用 | 第67-70页 |
| 1. SAP 点突变R32Q 仍与PIX 相互作用 | 第67-68页 |
| 2. SAP-SH2 功能域的C 末端介导了与PIX 的结合 | 第68-69页 |
| 3. PIX 与 Fyn 竞争结合SAP | 第69-70页 |
| 三、 SAP 介导了PIX 被招募到活化的淋巴细胞表面受体家族成员上 | 第70-75页 |
| 1. SAP-SH2 功能域的N 末端对284 的结合是必需的 | 第71-72页 |
| 2. SAP 介导了PIX 被招募到活化的淋巴细胞表面受体284 上 | 第72-73页 |
| 3. EAT2 不能介导PIX 被招募到活化的淋巴细胞表面受体284 上 | 第73-74页 |
| 4. SAP 介导了PIX 被招募到SLAM 家族受体CD299 上 | 第74-75页 |
| 四、 PIX 的SH3 功能域介导了PIX 与SAP 的相互作用 | 第75-80页 |
| 1. PIX 的 SH3 功能域对PIX 与 SAP 的结合是充分而必要的 | 第75-77页 |
| 2. PIX 点突变 P56L 仍与 SAP 相互作用 | 第77-78页 |
| 3. 完整的 PIX-SH3 功能域对 SAP 的结合是必需的 | 第78-79页 |
| 4. SAP 与 PAK 竞争结合 PIX | 第79-80页 |
| 五、 SAP, PIX, Cdc42 三者形成复合体 | 第80-83页 |
| 1. PIX 与野生型及活化形式的 Cdc42 结合 | 第80-81页 |
| 2. PIX 的 SH3 功能域对 Cdc42 的结合是不必需的 | 第81-82页 |
| 3. PIX 介导了 SAP, PIX, Cdc42 三者形成复合体 | 第82-83页 |
| 六、 SAP,PIX 的结合对 PAK 的激酶活性没有影响 | 第83-85页 |
| 1. SAP, PIX 的结合对 PAK 的激酶活性没有影响 | 第83-84页 |
| 2. SAP,PIX 的结合对活化形式 Cdc42 诱导的 PAK 激酶活性没有影响 | 第84-85页 |
| 七、 通过报告基因系统筛选SAP 在 NFkB，p53 和AP-1 信号通路中的作用 | 第85-89页 |
| 1. SAP 过量表达对 NFkB 信号通路没有影响 | 第85-86页 |
| 2. SAP 过量表达对p53 信号通路没有影响 | 第86-87页 |
| 3. SAP 过量表达对 AP-1 信号通路没有影响 | 第87-89页 |
| 八、 SAP 的过量表达与离子霉素协同激活 T 细胞中的 NFAT 通路 | 第89-94页 |
| 1. SAP 的过量表达激活PMA 与离子霉素协同诱导的 NFAT 通路 | 第89-91页 |
| 2. SAP 的过量表达与离子霉素协同激活 T 细胞中的 NFAT 通路 | 第91-93页 |
| 3. 失活的 Ras 突变体阻断了 SAP 与离子霉素协同活化 NFAT 通路 | 第93-94页 |
| 九、 PIX 的SH3 功能域阻断 SAP 与离子霉素对 NFAT 通路的协同活化 | 第94-100页 |
| 1. PIX，Fyn 的过量表达不能直接激活 NFAT 通路 | 第94-95页 |
| 2. 过量表达 PIX 的 SH3 功能域阻断了 SAP 与离子霉素协同活化 NFAT 通路 | 第95-96页 |
| 3. PIX，Fyn 的 SH3 功能域与 SAP 有类似的结合能力 | 第96-100页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第100-106页 |
| 1. SAP 在免疫细胞中重要作用 | 第100-101页 |
| 2. PIX 相互作用的蛋白的分析 | 第101-103页 |
| 3. SAP-PIX 相互作用在 T 细胞活化中的作用 | 第103-104页 |
| 4. SAP-PIX 相互作用对 XLP 治疗方法的启示 | 第104-106页 |
| 第六章 参考文献 | 第106-119页 |
| 附录一 主要试剂 | 第119-122页 |
| 附录二 通用实验方法 | 第122-128页 |
| 致谢 | 第128-130页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第130-131页 |
| 攻读博士学位期间参与的国家项目 | 第131-132页 |
| 攻读博士学位期间申请的专利 | 第132-134页 |
