| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-28页 |
| ·小麦条锈病 | 第13-21页 |
| ·小麦条锈病的发生历史、分布和危害 | 第13-14页 |
| ·植物抗病基因的研究 | 第14-20页 |
| ·植物抗病基因的作用机制 | 第14-15页 |
| ·植物抗病基因的结构与功能 | 第15-17页 |
| ·植物抗病基因的克隆与分离方法 | 第17-20页 |
| ·小麦抗条锈基因的研究 | 第20-21页 |
| ·病程相关蛋白 | 第21-23页 |
| ·病程相关蛋白的定义、命名和生物学性质 | 第21-22页 |
| ·病程相关蛋白的诱导和产生 | 第22页 |
| ·病程相关蛋白与植物的抗病性 | 第22-23页 |
| ·病程相关蛋白参与植物抗病的机理 | 第22页 |
| ·病程相关蛋白抗病性的利用 | 第22-23页 |
| ·类甜蛋白 | 第23-24页 |
| ·类甜蛋白的定义和性质 | 第23页 |
| ·类甜蛋白的生物学功能 | 第23-24页 |
| ·类甜蛋白的抗真菌活性 | 第23-24页 |
| ·类甜蛋白的其他生物学功能 | 第24页 |
| ·RACE 技术 | 第24-27页 |
| ·克隆全长cDNA 的方法 | 第24-25页 |
| ·RACE 技术的原理和优缺点 | 第25-26页 |
| ·RACE 技术的原理 | 第25页 |
| ·RACE 技术的优点和缺点 | 第25-26页 |
| ·RACE 技术的应用及前景 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 小麦类甜蛋白基因TLP 的克隆与序列分析 | 第28-44页 |
| ·试验材料 | 第28页 |
| ·试验用小麦叶片及条锈菌的采集 | 第28页 |
| ·试剂盒、工具酶、克隆载体、菌种及其他试剂 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-36页 |
| ·小麦叶片总 RNA 的提取、纯化与质量检测 | 第28-29页 |
| ·小麦叶片总 RNA 的提取 | 第28-29页 |
| ·RNA 的纯化 | 第29页 |
| ·RNA 产量和质量的检测 | 第29页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第29-30页 |
| ·5’RACE和3’RACE反应 | 第30-31页 |
| ·引物的设计与合成 | 第30页 |
| ·RACE反应 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第31页 |
| ·PCR产物与载体的连接 | 第31-32页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第32页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·转化感受态细胞 | 第32页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第32-33页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第33页 |
| ·RACE产物的测序及序列拼接 | 第33-34页 |
| ·测序反应 | 第33-34页 |
| ·测序反应产物纯化 | 第34页 |
| ·RACE全长序列的拼接和验证 | 第34页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp的全长序列分析 | 第34页 |
| ·序列读码框分析 | 第34页 |
| ·序列相似性比对 | 第34页 |
| ·蛋白质序列和性质分析 | 第34页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp的半定量RT-PCR分析 | 第34-36页 |
| ·RNA的提取及质量检测 | 第34页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第34-35页 |
| ·以β-Tublin为内参调整各时间点模版量 | 第35页 |
| ·tlp基因的差异表达情况 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·小麦叶片总RNA 的提取 | 第36页 |
| ·5’RACE和3’RACE扩增的结果 | 第36-37页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp全长序列拼接的结果 | 第37页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp全长序列分析的结果 | 第37-40页 |
| ·序列读码框分析的结果 | 第37-38页 |
| ·序列相似性比对的结果 | 第38页 |
| ·蛋白质序列和性质分析的结果 | 第38-40页 |
| ·tlp基因的半定量RT-PCR 分析 | 第40-41页 |
| ·tlp 基因在非亲和组合里的表达情况 | 第40页 |
| ·tlp 基因在亲和组合里的表达情况 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| ·影响RACE 实验成功的因素 | 第41-42页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp | 第42-44页 |
| 第三章 小麦类甜蛋白基因TLP 的原核表达 | 第44-57页 |
| ·试验材料 | 第44页 |
| ·菌种、载体、工具酶与试剂盒 | 第44页 |
| ·试验用主要试剂 | 第44页 |
| ·试验用主要仪器 | 第44页 |
| ·试验方法 | 第44-50页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp ORF的克隆 | 第44-45页 |
| ·引物的设计 | 第44页 |
| ·tlp 基因ORF的PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·融合表达载体TLP-pET-32a的构建 | 第45-46页 |
| ·克隆载体及表达载体的酶切 | 第45页 |
| ·目的片段与表达载体pET-32a的连接 | 第45-46页 |
| ·转化及重组子的筛选 | 第46页 |
| ·融合表达载体的转化 | 第46页 |
| ·融合蛋白诱导表达条件的确定 | 第46-48页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| ·融合表达蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| ·用Triton X-100和尿素洗涤及纯化包涵体 | 第49页 |
| ·用His-Trap亲和柱纯化 | 第49-50页 |
| ·结果与分析 | 第50-55页 |
| ·小麦类甜蛋白基因tlp ORF的克隆 | 第50页 |
| ·表达载体TLP-pET-32a的构建 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第51-53页 |
| ·最佳IPTG诱导浓度的确定 | 第51页 |
| ·最佳IPTG诱导时间的确定 | 第51页 |
| ·不同诱导条件对融合蛋白表达形式的影响 | 第51-53页 |
| ·融合表达蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| ·用Triton X-100和尿素对融合表达蛋白进行纯化 | 第53页 |
| ·融合表达蛋白的亲和柱层析纯化 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-57页 |
| ·ORF的克隆 | 第55页 |
| ·表达载体的构建 | 第55页 |
| ·表达系统的选择 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白诱导表达条件的确定 | 第56页 |
| ·包涵体的形成与纯化 | 第56页 |
| ·进一步研究设想 | 第56-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录1 | 第65-67页 |
| 附录2 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69页 |