| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 西红花7,8-二加氧酶基因的克隆 | 第10-28页 |
| 摘要 | 第10页 |
| 1 引言 | 第10-11页 |
| 2 材料和方法 | 第11-18页 |
| ·材料 | 第11-13页 |
| ·植物材料 | 第11页 |
| ·菌株 | 第11页 |
| ·质粒 | 第11-12页 |
| ·培养基 | 第12页 |
| ·质粒提取液 | 第12页 |
| ·试剂盒和工具酶 | 第12-13页 |
| ·药品 | 第13页 |
| ·引物 | 第13页 |
| ·方法 | 第13-18页 |
| ·西红花酸合成酶(7,8-二加氧酶)基因的克隆及序列分析 | 第13-16页 |
| ·Southern杂交 | 第16-18页 |
| 3 实验结果 | 第18-26页 |
| ·柱头总RNA和幼叶DNA的质量分析 | 第18-19页 |
| ·西红花CsZCD,CsZCD-new基因片段的克隆 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的大肠杆菌转化子的鉴定 | 第20-21页 |
| ·西红花7,8-二加氧酶基因的测序结果 | 第21-26页 |
| ·基因的拷贝数分析 | 第26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| 第二章 西红花7,8-二加氧酶基因在大肠杆菌中的表达与检测 | 第28-51页 |
| 摘要 | 第28页 |
| 1 引言 | 第28-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-37页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·质粒载体 | 第29页 |
| ·菌株 | 第29页 |
| ·实验动物 | 第29-30页 |
| ·试剂、试剂盒、酶 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·引物 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-37页 |
| ·CsZCD,CsZCD-new基因的制备 | 第32页 |
| ·表达载体的制备 | 第32页 |
| ·载体构建 | 第32页 |
| ·大肠杆菌JM109和M15感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| ·重组子的转化 | 第33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33页 |
| ·重组子的鉴定 | 第33-34页 |
| ·外源基因的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的Western鉴定 | 第35页 |
| ·重组蛋白的可溶性检测 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·用纯化蛋白免疫家兔 | 第36-37页 |
| ·家兔抗血清的ELISA检测和Western分析 | 第37页 |
| ·抗血清检测栀子未成熟果实总蛋白 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-45页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·重组质粒表达的检测 | 第38-43页 |
| ·基因片段的菌落PCR和双酶切检测 | 第38-40页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第40-41页 |
| ·表达产物的Western Blot检测 | 第41页 |
| ·表达产物可溶性检测 | 第41-42页 |
| ·表达产物的纯化 | 第42-43页 |
| ·抗血清的滴度测定 | 第43-44页 |
| ·抗血清的特异性鉴定 | 第44-45页 |
| ·抗血清检测栀子末成熟果实的总蛋白 | 第45页 |
| 4 讨论 | 第45-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 文献综述 | 第51-77页 |
| 外源基因在大肠杆菌中表达的研究进展 | 第51-77页 |
| 1 大肠杆菌表达系统的应用历史 | 第51-52页 |
| 2 表达量 | 第52-62页 |
| ·外源基因中密码子的应用 | 第53-54页 |
| ·共表达大肠杆菌稀有密码子tRNA基因 | 第53页 |
| ·用点突变的方法改变某些碱基 | 第53-54页 |
| ·增强子的使用 | 第54页 |
| ·启动子的选择 | 第54-56页 |
| ·上游调控元件 | 第56页 |
| ·mRNA的一级和二级结构 | 第56-58页 |
| ·mRNA 5’-UTR的一级结构 | 第56-57页 |
| ·mRNA 5’-UTR的二级结构 | 第57页 |
| ·mRNA 3’-UTR | 第57-58页 |
| ·翻译体系 | 第58-59页 |
| ·翻译的终止 | 第59页 |
| ·外源蛋白在宿主大肠杆菌细胞中的降解 | 第59-60页 |
| ·质粒拷贝数和质粒稳定性 | 第60-61页 |
| ·诱导时菌体的生长密度 | 第61页 |
| ·宿主菌的培养控制 | 第61-62页 |
| ·补料分批培养 | 第61-62页 |
| ·连续培养 | 第62页 |
| ·透析培养 | 第62页 |
| 3 表达活性 | 第62-74页 |
| ·胞质内表达 | 第62-73页 |
| ·非融合蛋白表达方式 | 第62-63页 |
| ·融合蛋白表达方式 | 第63-73页 |
| ·蛋白分泌型表达 | 第73-74页 |
| 4 实验步骤的简化 | 第74-75页 |
| 5 成本控制 | 第75-76页 |
| 6 结论与展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 在读期间论文发表情况 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
