| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.IFN-γ的结构和特点 | 第11-12页 |
| 2.IFN-γ的产生和调节 | 第12页 |
| 3.IFN-γ的生物学功能 | 第12-14页 |
| ·抗病毒作用 | 第12-13页 |
| ·抗肿瘤作用 | 第13页 |
| ·免疫调节作用 | 第13-14页 |
| ·内源性γ干扰素的生物学活性 | 第14页 |
| 4.IFN-γR介导的信号途径 | 第14-16页 |
| ·IFN-γ受体 | 第14-15页 |
| ·IFN-γR介导的信号转导 | 第15-16页 |
| 5.γ干扰素与其它细胞因子的关系 | 第16-17页 |
| ·IFN-γ与IL-1α的关系 | 第16-17页 |
| ·IFN-γ与IL-2的关系 | 第17页 |
| ·IFN-γ与IL-1和IL-6的关系 | 第17页 |
| ·IFN-γ与TNF的关系 | 第17页 |
| ·IFN-γ与IL-4的关系 | 第17页 |
| 6.IFN-γ在诊断和治疗方面的应用 | 第17-19页 |
| 7.小结 | 第19-20页 |
| 试验部分 | 第20-58页 |
| 第一章 荣昌猪、内江猪干扰素γ基因cDNA的克隆与序列分析 | 第20-33页 |
| 1 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·主要试剂与试验动物 | 第20-21页 |
| ·溶液配制 | 第21-22页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第21页 |
| ·质粒大量提取所用溶液 | 第21页 |
| ·细胞培养用液 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·淋巴细胞的分离与培养 | 第22页 |
| ·淋巴细胞总RNA的提取 | 第22-23页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·IFN-γ cDNA的扩增 | 第23-24页 |
| ·IFN-γ cDNA的克隆 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·序列测定 | 第26页 |
| ·IFN-γ基因序列的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·IFN-γ基因cDNA的RT-PCR扩增 | 第27页 |
| ·重组质粒的PCR和双酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第28-29页 |
| ·生物信息学分析 | 第29-30页 |
| ·IFN-γ基因的序列分析 | 第29页 |
| ·IFN-γ基因的多序列比对分析 | 第29页 |
| ·IFN-γ基因编码的蛋白质序列比对分析 | 第29页 |
| ·核苷酸同源性分析 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| ·淋巴细胞培养 | 第30页 |
| ·高纯度RNA的获得和防止RNA降解 | 第30-31页 |
| ·IFN-γ的相关研究 | 第31-32页 |
| 小结 | 第32-33页 |
| 第二章 荣昌猪干扰素-γ基因的原核表达研究 | 第33-58页 |
| 1.材料与方法 | 第33-44页 |
| ·实验材料 | 第33-35页 |
| ·主要试剂和菌株 | 第33-34页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第34-35页 |
| ·实验仪器 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-44页 |
| ·表达引物的设计 | 第35-36页 |
| ·荣昌猪IFN-γ基因的亚克隆 | 第36页 |
| ·pET-32a(+)原核表达质粒载体的构建 | 第36-38页 |
| ·pBV220原核表达质粒载体的构建 | 第38-39页 |
| ·IFN-γ在pET-32a(+)表达系统中的表达 | 第39-43页 |
| ·IFN-γ在pBV220表达系统中的表达 | 第43-44页 |
| 2.结果 | 第44-53页 |
| ·荣昌猪IFN-γ基因的亚克隆 | 第44-45页 |
| ·IFN-γ基因的扩增 | 第44页 |
| ·重组质粒pMD-R-IFN-γ_m的PCR和酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒pMD-R-IFN-γ_m的测序测定 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMD-R-IFN-γ_s的PCR和酶切鉴定 | 第45页 |
| ·pET-32a(+)重组表达质粒的鉴定 | 第45-47页 |
| ·pBV220重组表达质粒的鉴定 | 第47页 |
| ·IFN-γ在pET-32a(+)表达系统中的表达 | 第47-51页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第47-48页 |
| ·Western-blotting分析 | 第48-49页 |
| ·表达条件优化 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白的纯化和活性检测 | 第50-51页 |
| ·pBV220的原核表达 | 第51-53页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第51-52页 |
| ·42℃诱导的重组菌的转录检测 | 第52-53页 |
| 3 讨论 | 第53-58页 |
| ·关于蛋白表达系统 | 第53-55页 |
| ·pET32a(+) | 第53-54页 |
| ·pBV220 | 第54-55页 |
| ·含信号肽序列的IFN-γ基因在原核系统中不表达的原因分析 | 第55页 |
| ·关于pET32a(+)表达系统表达的优化 | 第55-56页 |
| ·关于蛋白的纯化 | 第56-58页 |
| ·细胞破碎 | 第56页 |
| ·沉淀物的重悬 | 第56页 |
| ·2% DOC洗涤包涵体沉淀 | 第56页 |
| ·用N-十二烷基肌氨酸钠溶解包涵体沉淀 | 第56-57页 |
| ·透析除去去污剂使可溶性蛋白折叠 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
