| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-14页 |
| 前言 | 第14-30页 |
| 1. 人β-珠蛋白基因簇与真核基因表达调控研究 | 第14-22页 |
| ·人β-珠蛋白基因簇的结构特点 | 第14-15页 |
| ·人β-珠蛋白基因簇是研究真核基因表达调控的经典模型 | 第15-21页 |
| ·远距离增强元件LCR和近端启动子的协同作用机制 | 第15-17页 |
| ·参与人β-珠蛋白基因簇调控的反式作用因子种类及其作用机制 | 第17-18页 |
| ·表观遗传调控与人β-珠蛋白基因簇时空特异性的表达 | 第18-21页 |
| ·表观遗传调控与人类遗传疾病的关系 | 第21-22页 |
| 2. 人β-珠蛋白基因簇相关的分子遗传病 | 第22-28页 |
| ·β-地中海贫血和镰刀型贫血病及其发病机制 | 第22-23页 |
| ·人γ-珠蛋白基因的激活表达是治疗这类疾病的重要策略 | 第23-24页 |
| ·通过药物激活人γ-珠蛋白基因的表达是一条有效的途径 | 第24-25页 |
| ·基于表观遗传调控原理的人γ-珠蛋白基因的诱导表达与激活 | 第25-26页 |
| ·P38MAPK信号通路及其在HDACi激活人γ-珠蛋白基因表达中的作用 | 第26-28页 |
| 3. 本研究的理论问题与主要内容 | 第28-30页 |
| 材料与方法 | 第30-45页 |
| 1. 实验材料 | 第30-32页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·细胞系 | 第30页 |
| ·限制性内切酶及修饰酶 | 第30页 |
| ·实验用抗体 | 第30页 |
| ·其它主要试剂和材料 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-45页 |
| ·基本技术路线 | 第32页 |
| ·细菌操作与质粒的转化 | 第32-33页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5-α制备 | 第32页 |
| ·质粒的转化和扩增 | 第32页 |
| ·质粒的提取和纯化 | 第32-33页 |
| ·细胞培养 | 第33-34页 |
| ·细胞的生长条件 | 第33页 |
| ·细胞的传代 | 第33页 |
| ·细胞的复苏及冻存 | 第33-34页 |
| ·Apicidin对K562和Hela细胞的不同浓度和时间的处理 | 第34页 |
| ·Apicidin影响K562细胞增殖的MTT分析 | 第34页 |
| ·流式细胞仪检测Apicidin对K562细胞周期的影响 | 第34-35页 |
| ·半定量RT-PCR对人β-类珠蛋白基因和红系转录因子等的表达分析 | 第35-36页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35页 |
| ·RT-PCR检测基因转录水平上的表达 | 第35-36页 |
| ·Western-Blotting分析组蛋白修饰模式和转录因子蛋白水平的变化 | 第36-38页 |
| ·裂解细胞 | 第36页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第36页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第36-37页 |
| ·制备分离胶 | 第36-37页 |
| ·制备浓缩(堆积)胶 | 第37页 |
| ·制备样品和上样 | 第37页 |
| ·电泳 | 第37页 |
| ·染色 | 第37页 |
| ·转膜 | 第37-38页 |
| ·抗原抗体反应 | 第38页 |
| ·辣根过氧化物酶化学发光法检测蛋白 | 第38页 |
| ·人β-类珠蛋白基因簇染色质结构和转录调控因子募集的ChIP分析 | 第38-42页 |
| ·细胞培养 | 第38页 |
| ·细胞固定 | 第38-39页 |
| ·细胞核的提取 | 第39页 |
| ·细胞核的裂解与超声处理 | 第39页 |
| ·超声结果的分析 | 第39页 |
| ·免疫沉淀 | 第39-40页 |
| ·DNA的分离及纯化 | 第40页 |
| ·半定量PCR反应 | 第40-42页 |
| ·限制性内切酶柔顺性实验 | 第42-43页 |
| ·FISH技术检测经Apicidin处理的β-珠蛋白基因簇核定位模式 | 第43-45页 |
| 实验结果 | 第45-64页 |
| 1. Apicidin对K562细胞增殖与分化的影响分析 | 第45-49页 |
| ·Apicidin对K562细胞的增殖活性具有微弱抑制作用 | 第45-46页 |
| ·Apicidin可诱导K562细胞周期阻滞和凋亡 | 第46页 |
| ·Apicidin能够诱导K562细胞向红系方向分化 | 第46-47页 |
| ·Apicidin使人γ-珠蛋白基因的表达明显升高 | 第47-48页 |
| ·Apicidin使GATA-1表达上调而GATA-2表达下降 | 第48-49页 |
| 2. Apicidin明显增加K562细胞总H3、H4乙酰化和H3 K4双甲基化修饰水平 | 第49-50页 |
| 3. ChIP检测Apicidin对β-珠蛋白基因簇染色质组蛋白修饰状态的影响 | 第50-54页 |
| ·ChIP分析条件的建立 | 第51-52页 |
| ·Apicidin使人β-珠蛋白基因簇LCR区活性组蛋白修饰水平明显升高 | 第52-53页 |
| ·Apicidin使人γ-和ε启动子、5'区及基因间区活性组蛋白修饰发生动态变化 | 第53-54页 |
| 4. Apicidin可激活P38 MAPK信号通路而瞬时抑制ERK通路 | 第54-55页 |
| 5. P38 MAPK通路的阻断抑制了Apicidin的诱导作用 | 第55-56页 |
| 6. P38 MAPK通路的阻断使Apicidin处理下β-珠蛋白基因簇组蛋白修饰水平下降 | 第56-58页 |
| 7. P38 MAPK通路的阻断抑制了Apicidin促使的GATA-1表达上调 | 第58-59页 |
| 8. 人β-珠蛋白基因启动子和LCR区RNA Pol Ⅱ和转录因子的结合分析 | 第59-62页 |
| ·Apicidin使Pol Ⅱ的募集水平明显升高,且不受P38 MAPK通路的调节 | 第59-60页 |
| ·Apicidin处理和P38 MAPK信号通路阻断前后转录因子的结合分析 | 第60-62页 |
| 9. Apicidin可明显促使人β-簇从CT区的环出 | 第62-64页 |
| 讨论 | 第64-82页 |
| 1. Apicidin可诱导增强人γ-珠蛋白基因的表达并具备潜在的临床应用前景 | 第64-65页 |
| 2. Apicidin与P38 MAPK通路协同作用提高β-簇染色质活性状态以激活人γ-珠蛋白基因的表达 | 第65-73页 |
| ·LCR、ε与γ基因间区组蛋白乙酰化水平的提高显著加强了染色质成环作用 | 第66-69页 |
| ·基因间转录与pol Ⅱ的募集是Apicidin增强人γ-珠蛋白基因表达的潜在分子机制 | 第69-71页 |
| ·P38 MAPK信号通路的阻断可能破坏了组蛋白共价修饰问的协调作用 | 第71-72页 |
| ·组蛋白乙酰化转移酶可能介导了P38 MAPK通路参与增强人γ-珠蛋白基因的表达 | 第72-73页 |
| 3. GATA-1、SP1、NF-E2/P45可能参与Apicidin、P38 MAPK通路协同增强人γ-珠蛋白基因的表达 | 第73-79页 |
| ·GATA-1 | 第73-76页 |
| ·NF-E2 | 第76-78页 |
| ·SP1 | 第78-79页 |
| 4. Apicidin影响β-珠蛋白基因簇核定位及其潜在的分子基础 | 第79-81页 |
| 5. 本研究不足之处和今后的工作设想 | 第81-82页 |
| 小结 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 文献综述 | 第93-105页 |
| 英文名词及缩写 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 个人简历 | 第109-111页 |
