中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-8页 |
第一部分 前言 | 第8-18页 |
一、避孕疫苗研究的基本概况 | 第8-13页 |
1 激素类避孕疫苗的研究概况 | 第8-9页 |
2 卵透明带避孕疫苗研究概况 | 第9页 |
3 精子特异抗原避孕疫苗的研究概况 | 第9-13页 |
·受精抗原1(fertilization antigen 1,FA-1) | 第10页 |
·精子蛋白17(sperm protein 17,Sp17) | 第10-11页 |
·透明质酸酶(hyaluronidase PH-20,PH-20) | 第11页 |
·乳酸脱氢酶C4同功酶 | 第11-12页 |
·受精素β(Fertilin β) | 第12-13页 |
二、CATSPER1的研究概况 | 第13-15页 |
1 CATSPER1基因及其蛋白质结构 | 第13-14页 |
2 CATSPER1在精子表面的定位 | 第14页 |
3 CATSPER1在受精过程中的作用 | 第14-15页 |
4 CATSPER1是免疫避孕疫苗研究中重要的候选靶分子 | 第15页 |
三、C3d分子免疫佐剂的研究概况 | 第15-17页 |
四、本研究的目的及意义 | 第17-18页 |
第二部分 实验材料与方法 | 第18-30页 |
·实验材料与仪器 | 第18-20页 |
·主要材料与试剂 | 第18-19页 |
·主要仪器设备 | 第19-20页 |
·本研究技术路线 | 第20页 |
·pVAX1-Catsper1_(S1-S6)和pVAX1-Catsper1_(S1-S6)-C3d3真核表达载体的构建 | 第20-28页 |
·pVAX1质粒的获得 | 第20页 |
·引物设计 | 第20-21页 |
·基因扩增 | 第21-22页 |
·构建重组质粒pVAX1-Catsper1_(S1-S6) | 第22-23页 |
·重组质粒鉴定 | 第23-25页 |
·重组质粒pVAX1-Catsper1_(S1-S6)-C3d3的构建 | 第25-28页 |
·动物免疫实验 | 第28页 |
·DNA疫苗免疫的抗体检测 | 第28-30页 |
·全精子抗原检测抗体 | 第28-29页 |
·间接免疫荧光法检测兔抗精子抗体与小鼠精子的反应 | 第29-30页 |
第三部分 实验结果 | 第30-37页 |
·RT-PCR法获得目的基因片段 | 第30-31页 |
·pVAX1-Catsper1_(S1-S6)和pVAX1-Catsper1_(S1-S6)-C3d3真核表达载体的构建结果 | 第31-33页 |
·两种DNA疫苗的免疫研究结果 | 第33-37页 |
·免疫新西兰兔的抗体反应结果 | 第33-34页 |
·免疫小鼠的抗体反应结果 | 第34-35页 |
·间接免疫荧光检测兔抗精子抗体与小鼠精子的反应结果 | 第35-37页 |
第四部分 讨论 | 第37-43页 |
·pVAX1-Catsper1_(S1-S6)和pVAX1-Catsper1_(S1-S6)-C3d3真核表达载体构建 | 第37-39页 |
·免疫效能的分析 | 第39-42页 |
·全精子抗原ELISA法检测抗精子抗体反应 | 第39-40页 |
·间接免疫荧光法检测抗精子抗体与小鼠精子的反应 | 第40页 |
·C3d3分子免疫佐剂效能分析 | 第40-42页 |
·结论 | 第42-43页 |
第五部分 参考文献 | 第43-48页 |
附录 | 第48-61页 |
附录Ⅰ 本研究中所用常规实验方法 | 第48-51页 |
附录Ⅱ 本研究中所用试剂配方 | 第51-55页 |
附录Ⅲ 质粒pVAX1、pSG5.C3d3.YL图谱 | 第55-56页 |
附录Ⅳ 重组质粒测序结果 | 第56-60页 |
附录Ⅴ 英文缩略词索引 | 第60-61页 |
致谢 | 第61页 |