| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-48页 |
| 第一章 奶牛生产瘫痪的病理生理学 | 第14-30页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 奶牛钙稳态的调控 | 第14-26页 |
| ·肠道对CA~(2+)的吸收与调控 | 第15-18页 |
| ·吸收的分子机制 | 第15-16页 |
| ·影响钙吸收的因素 | 第16-18页 |
| ·PTH的功能与调节 | 第18-20页 |
| ·骨骼系统对钙稳态的调节 | 第20-24页 |
| ·成骨过程 | 第20-23页 |
| ·破骨过程 | 第23-24页 |
| ·肾脏对钙稳态的调节 | 第24-26页 |
| 2 产后瘫痪的病理学 | 第26-30页 |
| ·产后瘫痪的病理学假说 | 第26-27页 |
| ·酸碱生理学的强离子差理论 | 第27-30页 |
| ·体内的阴阳离子 | 第27-28页 |
| ·DCAB调节的实际应用 | 第28-30页 |
| 第二章 骨骼发育和形成的遗传控制 | 第30-48页 |
| ·成骨第一步：软骨发生 | 第30-31页 |
| ·软骨发育的调控 | 第31-36页 |
| ·分泌因子对非肥大软骨细胞的调控 | 第31-33页 |
| ·转录因子对非肥大软骨细胞的分化调控 | 第33-34页 |
| ·分泌性因子对肥大软骨细胞分化的调节 | 第34-35页 |
| ·转录因子对软骨细胞肥大的分化 | 第35-36页 |
| ·相关因子对骨发育的调控 | 第36-42页 |
| ·TGF-βs | 第36-37页 |
| ·Fgfs | 第37-39页 |
| ·PTH相关蛋白(PTHrP)和PTH | 第39-40页 |
| ·IGF (insulin-like growth factors) | 第40-41页 |
| ·表皮生长因子和相关分子 | 第41-42页 |
| ·分泌性分子对成骨细胞分化的调控 | 第42-44页 |
| ·RUNX2，OSTERIX和ATF4对成骨细胞分化的调控 | 第44-48页 |
| 第二部分 试验研究 | 第48-104页 |
| 第三章 斯钙素-1在新生奶牛成骨细胞的定位和表达 | 第48-64页 |
| ·研究背景 | 第49-50页 |
| ·材料与方法 | 第50-56页 |
| ·试验动物 | 第50页 |
| ·仪器设备 | 第50-51页 |
| ·试剂配制 | 第51-52页 |
| ·奶牛成骨细胞的分离培养与鉴定 | 第52-54页 |
| ·细胞原代培养 | 第52页 |
| ·细胞传代 | 第52-53页 |
| ·细胞增殖曲线绘制 | 第53页 |
| ·细胞染色 | 第53页 |
| ·SEM观察细胞 | 第53页 |
| ·成骨诱导 | 第53-54页 |
| ·碱性磷酸酶(ALP)染色 | 第54页 |
| ·骨钙素(Osteocalcin)免疫组化染色 | 第54页 |
| ·STC-1在奶牛成骨细胞的定位与表达 | 第54-56页 |
| ·STC-1免疫组化 | 第54-55页 |
| ·STC-1 RT-PCR RNA提取 | 第55-56页 |
| ·结果 | 第56-60页 |
| ·细胞形态观察 | 第56-57页 |
| ·成骨细胞的鉴定 | 第57-59页 |
| ·增殖曲线 | 第59页 |
| ·STC-1在奶牛成骨细胞的表达 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-64页 |
| ·奶牛成骨细胞的培养与鉴定 | 第60-62页 |
| ·STC-1在奶牛成骨细胞的表达 | 第62-64页 |
| 第四章 STC-1对奶牛成骨细胞增殖和分化的影响 | 第64-75页 |
| ·研究背景 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-68页 |
| ·试剂配制 | 第65页 |
| ·所用仪器 | 第65-66页 |
| ·奶牛成骨细胞培养与鉴定(见3.3) | 第66页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞增殖的影响 | 第66-67页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞碱性磷酸酶和骨钙素分泌的影响 | 第67-68页 |
| ·碱性磷酸酶检测 | 第67页 |
| ·骨钙素的检测 | 第67-68页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞体外钙化的影响 | 第68页 |
| ·数据处理 | 第68页 |
| ·结果 | 第68-73页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞增殖的影响 | 第68-69页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞碱性磷酸酶与骨钙素分泌的影响 | 第69-71页 |
| ·碱性磷酸酶的变化 | 第69-70页 |
| ·骨钙素的含量变化 | 第70-71页 |
| ·STC-1对奶牛成骨细胞体外矿化的影响 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-75页 |
| ·STC-1对成骨细胞增殖的影响 | 第73-74页 |
| ·STC-1对成骨细胞碱性磷酸酶、骨钙素和体外矿化的影响 | 第74-75页 |
| 第五章 COCL_2诱导奶牛成骨细胞缺氧凋亡及对STC-1基因表达的影响 | 第75-90页 |
| ·研究背景 | 第76页 |
| ·材料与方法 | 第76-80页 |
| ·所用仪器设备 | 第76-77页 |
| ·奶牛成骨细胞培养与鉴定(见3.3) | 第77页 |
| ·CoCl2处理成骨细胞 | 第77-78页 |
| ·凋亡细胞染色 | 第78页 |
| ·AO/EB染色 | 第78页 |
| ·免疫组化 | 第78页 |
| ·免疫荧光 | 第78页 |
| ·STC-1等基因变化的检测 | 第78-80页 |
| ·RNA提取 | 第78-79页 |
| ·RT-PCR | 第79-80页 |
| ·PCR体系(25μl) | 第80页 |
| ·Real-time PCR(25μl) | 第80页 |
| ·数据处理 | 第80页 |
| ·结果 | 第80-87页 |
| ·凋亡的形态学变化 | 第80-82页 |
| ·AO/EB对凋亡的检测 | 第82-83页 |
| ·相关基因表达的变化 | 第83-87页 |
| ·讨论 | 第87-90页 |
| ·凋亡诱导 | 第87-88页 |
| ·基因表达变化 | 第88-90页 |
| 第六章 磁性纳米铁对奶牛成骨细胞的细胞毒性研究 | 第90-104页 |
| ·研究背景 | 第91页 |
| ·材料与方法 | 第91-95页 |
| ·试验动物 | 第91页 |
| ·试验用细胞 | 第91-92页 |
| ·仪器设备 | 第92-93页 |
| ·MNP合成 | 第93页 |
| ·MNP的理化特性 | 第93-94页 |
| ·透射电镜观察 | 第93-94页 |
| ·Zeta电势检测 | 第94页 |
| ·超顺磁性检测 | 第94页 |
| ·细胞内吞实验 | 第94页 |
| ·细胞活力曲线 | 第94页 |
| ·细胞骨架荧光染色细胞骨架染色 | 第94-95页 |
| ·生化指标检测 | 第95页 |
| ·乳酸脱氢酶(LDH)检测 | 第95页 |
| ·总SOD与过氧化氢酶检测 | 第95页 |
| ·数据处理 | 第95页 |
| ·结果 | 第95-101页 |
| ·MNP的理化特性 | 第95-97页 |
| ·成骨细胞对Fe_3O_4磁性纳米颗粒吞噬 | 第97-98页 |
| ·细胞活力曲线 | 第98-99页 |
| ·细胞LDH释放量 | 第99页 |
| ·细胞骨架蛋白F-actin染色 | 第99-100页 |
| ·MNP对奶牛成骨细胞过氧化物酶和SOD的影响 | 第100-101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| ·MNP理化特性 | 第101-102页 |
| ·MNP对奶牛成骨细胞的毒性 | 第102-104页 |
| 全文小结及创新点 | 第104-105页 |
| 参考文献 | 第105-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附录 | 第125页 |
