| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 英文缩略语表(ABBREVIATION) | 第12-13页 |
| 第1章 前言 | 第13-50页 |
| ·乙脑简介和历史背景 | 第13-14页 |
| ·简介 | 第13页 |
| ·历史背景 | 第13-14页 |
| ·乙脑流行病学 | 第14-16页 |
| ·传染源和传播媒介 | 第14页 |
| ·流行特征 | 第14-15页 |
| ·流行地区 | 第14-15页 |
| ·流行季节 | 第15页 |
| ·人群分布 | 第15页 |
| ·流行原因 | 第15页 |
| ·致病机制 | 第15-16页 |
| ·乙脑的临床症状和病理变化 | 第16-17页 |
| ·临床症状 | 第16页 |
| ·病理变化 | 第16-17页 |
| ·乙脑诊断方法 | 第17-18页 |
| ·病毒分离 | 第17页 |
| ·病毒抗原检测 | 第17页 |
| ·血清学检测方法 | 第17页 |
| ·其它方法 | 第17-18页 |
| ·乙脑的预防和治疗 | 第18页 |
| ·乙脑的预防 | 第18页 |
| ·乙脑的治疗 | 第18页 |
| ·乙脑病毒的特性 | 第18-24页 |
| ·乙脑病毒的分类及理化性质 | 第18-19页 |
| ·乙脑病毒的生物学特性 | 第19-20页 |
| ·血凝特性 | 第19页 |
| ·培养特性 | 第19页 |
| ·抗原性和基因型 | 第19-20页 |
| ·遗传进化 | 第20页 |
| ·乙脑病毒分子生物学研究进展 | 第20-24页 |
| ·基因组结构和功能 | 第20-21页 |
| ·病毒基因编码的蛋白质 | 第21-24页 |
| ·乙脑疫苗研究进展 | 第24-31页 |
| ·乙脑传统疫苗 | 第24-26页 |
| ·鼠脑灭活疫苗 | 第24-25页 |
| ·地鼠肾细胞灭活疫苗 | 第25页 |
| ·减毒活疫苗 | 第25-26页 |
| ·乙脑新型疫苗 | 第26-31页 |
| ·Vero细胞纯化灭活疫苗 | 第26-27页 |
| ·亚单位疫苗 | 第27-28页 |
| ·核酸疫苗 | 第28-29页 |
| ·活病毒载体疫苗 | 第29-31页 |
| ·RNA干扰研究进展 | 第31-35页 |
| ·RNA干扰的发现 | 第31页 |
| ·RNA干扰的分子生物学机制 | 第31-33页 |
| ·RNAi的分子生物学特性 | 第33页 |
| ·RNAi抗病毒感染的研究进展 | 第33-35页 |
| ·RNAi抗病毒作用的问题与展望 | 第35页 |
| ·新型核酸疫苗——“自杀性”DNA疫苗 | 第35-47页 |
| ·核酸疫苗研究 | 第35-38页 |
| ·免疫机理 | 第36页 |
| ·核酸疫苗的特点 | 第36-38页 |
| ·RNA复制子研究进展 | 第38-43页 |
| ·甲病毒RNA复制子 | 第38-39页 |
| ·RNA复制子的特点 | 第39页 |
| ·甲病毒RNA复制子载体的研究进展 | 第39-41页 |
| ·甲病毒复制子RNA疫苗的应用 | 第41-43页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗 | 第43-47页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗的构建 | 第43-44页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗的应用 | 第44-47页 |
| ·蛋白转导的研究进展 | 第47-50页 |
| ·几种常见的蛋白质转导域 | 第47-48页 |
| ·蛋白转导机制 | 第48-49页 |
| ·BHV-1VP22蛋白转导特性的确定 | 第49页 |
| ·VP22在增强免疫方面的应用 | 第49-50页 |
| 第2章 研究目的和意义 | 第50-51页 |
| 第3章 材料与方法 | 第51-64页 |
| ·实验材料 | 第51-56页 |
| ·毒株、细胞与菌种 | 第51页 |
| ·载体与质粒 | 第51-53页 |
| ·主要药品与试剂盒 | 第53页 |
| ·本研究中所用的寡核苷酸引物 | 第53-54页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第54-55页 |
| ·缓冲液 | 第55-56页 |
| ·质粒提取用缓冲液 | 第55页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第55页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第55-56页 |
| ·ELISA缓冲液 | 第56页 |
| ·其它缓冲液 | 第56页 |
| ·实验动物 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-64页 |
| ·siRNA的设计与合成 | 第56-57页 |
| ·PCR或酶切产物的回收与纯化 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第58页 |
| ·连接产物的转化 | 第58页 |
| ·质粒的小量制备(改良的碱裂解法) | 第58页 |
| ·质粒的大量制备(碱裂解法) | 第58-59页 |
| ·脂质体介导转化法(Lipfectin2000,Invitrogen Corp.) | 第59页 |
| ·RT-PCR方法 | 第59-60页 |
| ·细胞中JEV RNA的提取 | 第59-60页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第60页 |
| ·RT-PCR反应条件 | 第60页 |
| ·Western blot | 第60页 |
| ·间接免疫荧光染色法检测外源蛋白在动物细胞中的表达 | 第60-61页 |
| ·空斑形成实验 | 第61页 |
| ·诱导表达 | 第61页 |
| ·包涵体提取、纯化与复性 | 第61-62页 |
| ·用于SDS-PAGE电泳的包涵体提取 | 第61页 |
| ·用于ELISA抗原的包涵体的提取、纯化与复性 | 第61-62页 |
| ·NS1-ELISA和E-ELISA方法的建立 | 第62页 |
| ·最佳包被浓度及血清最佳稀释倍数的确定(方阵滴定) | 第62页 |
| ·ELISA的操作步骤 | 第62页 |
| ·微量中和试验(殷震和刘景华,1997)。 | 第62页 |
| ·中和抗体滴度测定 | 第62页 |
| ·小鼠脾淋巴细胞的分离 | 第62-63页 |
| ·淋巴细胞增殖试验(Lymphocytes Proliferation) | 第63页 |
| ·统计学分析 | 第63-64页 |
| 第4章 结果与分析 | 第64-80页 |
| ·SIRNA对JEVNS1基因表达的抑制 | 第64-71页 |
| ·siRNA表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·NS1基因与报告基因(EGFP)融合表达载体的构建 | 第65-66页 |
| ·NS1基因与EGFP融合表达的荧光检测 | 第66-67页 |
| ·siRNA表达质粒与质粒pCDNS1-EGFP共转染细胞后的荧光检测 | 第67-68页 |
| ·流式细胞检测EGFP的表达情况 | 第68页 |
| ·Western blot检测情况 | 第68-70页 |
| ·RT-PCR检测情况 | 第70-71页 |
| ·SIRNA对JEV复制的抑制 | 第71-74页 |
| ·间接免疫荧光检测siRNA对JEV复制的抑制效果 | 第71-72页 |
| ·Western blot检测siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR检测siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第73页 |
| ·病毒空斑形成实验检测siRNA对病毒复制的抑制效果 | 第73-74页 |
| ·乙型脑炎“自杀性”DNA疫苗研究 | 第74-80页 |
| ·JEV NS1／E“自杀性”DNA疫苗表达质粒的构建 | 第74-75页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗表达质粒的酶切鉴定 | 第75-76页 |
| ·间接免疫荧光检测“自杀性”DNA疫苗中NS1和E基因在真核细胞中的表达 | 第76页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗pSNS1／pSBNS1和pSE／pSBE及常规DNA疫苗pCD NS1／E的体液免疫反应 | 第76-78页 |
| ·免疫小鼠特异性针对JEV NS1／E ELISA抗体检测 | 第76-78页 |
| ·免疫小鼠特异性针对JEV E中和抗体水平检测 | 第78页 |
| ·“自杀性”DNA疫苗pSNS1／pSBNS1和pSE／pSBE及常规DNA疫苗pCD NS1／E的细胞免疫反应 | 第78-80页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第80-86页 |
| ·讨论 | 第80-84页 |
| ·RNAi-抗乙脑病毒感染的新途径 | 第80页 |
| ·siRNA的靶基因选择 | 第80-81页 |
| ·siRNA的设计原则 | 第81-82页 |
| ·NS1在细胞中的定位 | 第82页 |
| ·siRNA对JEV复制的抑制作用 | 第82-83页 |
| ·乙型脑炎“自杀性”DNA疫苗与常规DNA疫苗的免疫效果比较 | 第83-84页 |
| ·VP22的免疫增强作用 | 第84页 |
| ·结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
