| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-22页 |
| ·未培养微生物 | 第9-10页 |
| ·宏基因组文库的构建和应用 | 第10-11页 |
| ·环境总DNA的提取与纯化 | 第11-12页 |
| ·DNA的提取 | 第11-12页 |
| ·DNA的纯化 | 第12页 |
| ·瘤胃微生物及纤维素分解菌 | 第12-15页 |
| ·瘤胃真菌 | 第13页 |
| ·瘤胃细菌 | 第13-14页 |
| ·瘤胃中原生动物 | 第14-15页 |
| ·瘤胃微生物产生的纤维素酶 | 第15-19页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第19-21页 |
| ·纤维素酶的结构 | 第19页 |
| ·催化功能域 | 第19页 |
| ·碳水化合物结合功能域 | 第19-20页 |
| ·连接桥(Linker) | 第20页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-41页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第22-23页 |
| ·菌种保存 | 第23-24页 |
| ·培养基、培养条件和抗生素 | 第24-25页 |
| ·常规溶液、缓冲液 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-41页 |
| ·质粒提取 | 第26-27页 |
| ·总DNA的部分消化 | 第27-28页 |
| ·电透析洗脱法回收DNA片段 | 第28-29页 |
| ·DNA的转化 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第31-32页 |
| ·牛瘤胃未培养细菌总DNA的提取及纯化 | 第32-34页 |
| ·牛瘤胃未培养细菌Cosmid文库的构建 | 第34-36页 |
| ·文库的筛选 | 第36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·基因的表达 | 第37-38页 |
| ·CMCase酶活测定 | 第38-39页 |
| ·系统进化树进化分析 | 第39-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-65页 |
| ·牛瘤胃未培养细菌总DNA的提取及纯化 | 第41-42页 |
| ·文库的构建 | 第42-43页 |
| ·文库的筛选 | 第43-46页 |
| ·表达CMCase活性克隆的筛选 | 第43-45页 |
| ·表达β-葡萄糖苷酶活性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因umbg13A克隆、鉴定与分析 | 第46-51页 |
| ·pGXN1009亚克隆 | 第46-47页 |
| ·umbg13A基因测序及分析 | 第47-50页 |
| ·Umbg13A蛋白的系统进化分析 | 第50-51页 |
| ·Umce15C基因的克隆、鉴定与分析 | 第51-55页 |
| ·pGXN1035的亚克隆 | 第51-53页 |
| ·pGXN1035的测序及分析 | 第53-55页 |
| ·Umce15D基因的克隆、鉴定与分析 | 第55-59页 |
| ·pGXN1067的亚克隆 | 第56-57页 |
| ·umce15D基因的测序及分析 | 第57-59页 |
| ·Umce15C蛋白和Umce15D蛋白的比较 | 第59-60页 |
| ·Umce15C蛋白和Umce15D蛋白的遗传进化分析 | 第60-61页 |
| ·Umce15D蛋白的表达和酶学活性的初步测定 | 第61-65页 |
| ·Umce15D的表达 | 第61-63页 |
| ·Umce15D蛋白内切β-1.4-葡聚糖酶活性的初步测定 | 第63-65页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第65-68页 |
| ·牛瘤胃未培养微生物宏基因组文库的构建及筛选 | 第65-66页 |
| ·纤维素酶基因的鉴定及表达 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录1：本论文中所用到的质粒多克隆位点图 | 第74-77页 |
| 附录2：参与的科研、取得的成果和发表的文章 | 第77页 |
