| 第1章 综述 | 第1-21页 |
| 1．1 纤维素与纤维素酶 | 第8-9页 |
| 1．1．1 纤维素 | 第8页 |
| 1．1．2 纤维素酶 | 第8-9页 |
| 1．1．3 纤维素酶的组成与分类 | 第9页 |
| 1．2 纤维素酶的研究进展 | 第9-10页 |
| 1．2．1 发现阶段 | 第9页 |
| 1．2．2 基础研究时期 | 第9-10页 |
| 1．2．3 分子生物学时代 | 第10页 |
| 1．3 黑曲霉中纤维素酶的研究进展 | 第10-12页 |
| 1．3．1 黑曲霉中内切β-葡聚糖酶的研究进展 | 第10-11页 |
| 1．3．2 黑曲霉中β－葡萄糖苷酶的研究进展 | 第11-12页 |
| 1．3．3 黑曲霉中纤维素酶的研究现状 | 第12页 |
| 1．4 纤维素酶的性质与酶系的作用机制 | 第12-15页 |
| 1．4．1 纤维素酶的分子量与分子组成 | 第12-13页 |
| 1．4．2 纤维素酶的最适pH、稳定性、抑制剂和活化剂 | 第13-14页 |
| 1．4．3 纤维素酶的诱导性 | 第14页 |
| 1．4．4 纤维素酶各组分的协同作用机制 | 第14-15页 |
| 1．5 纤维素酶的分子结构与功能及其催化的分子机制 | 第15-17页 |
| 1．5．1 纤维素酶的高级结构与结构域及其功能 | 第15-16页 |
| 1．5．2 纤维素酶催化的分子机制 | 第16-17页 |
| 1．6 纤维素酶的生产与分离纯化 | 第17-18页 |
| 1．6．1 纤维素酶的生产 | 第17页 |
| 1．6．2 纤维素酶的分离纯化 | 第17-18页 |
| 1．7 纤维素酶的应用 | 第18-19页 |
| 1．7．1 在食品工业上的应用 | 第18页 |
| 1．7．2 在饲料工业上的应用 | 第18-19页 |
| 1．7．3 在环境保护和处理纤维素废料中的应用 | 第19页 |
| 1．7．4 在其它方面的应用 | 第19页 |
| 1．8 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-39页 |
| 2．1 黑曲霉纤维素酶组分的分离纯化 | 第21-26页 |
| 2．1．1 粗酶液的制备及硫酸铵分级沉淀 | 第21-22页 |
| 2．1．2 凝胶过滤色谱法脱盐 | 第22-23页 |
| 2．1．3 离子交换色谱法 | 第23-26页 |
| 2．1．3．1 原理 | 第23-25页 |
| 2．1．3．2 对内切β-葡聚糖苷酶的纯 | 第25页 |
| 2．1．3．3 对β-葡萄糖苷酶的纯化 | 第25-26页 |
| 2．2 纤维素酶组分分析法 | 第26-32页 |
| 2．2．1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-30页 |
| 2．2．2 毛细管液相色谱（cLC） | 第30-31页 |
| 2．2．3 蛋白质含量测定——Folin-酚法 | 第31-32页 |
| 2．3 对纤维素酶组分的表征 | 第32-37页 |
| 2．3．1 纤维素酶活力测定及组分特异性表征 | 第32-33页 |
| 2．3．2 纯度鉴定与分子量标定 | 第33页 |
| 2．3．3 内切酶N-末端氨基酸序列测定及序列分析 | 第33-35页 |
| 2．3．4 黑曲霉纤维素酶的酶反应动力学 | 第35-36页 |
| 2．3．4．1 内切酶米氏常数（Km）的测定及水杨素的抑制作用 | 第35页 |
| 2．3．4．2 β-葡萄糖苷酶米氏常数（Kin）的测定 | 第35-36页 |
| 2．3．4．3 最适反应温度的测定 | 第36页 |
| 2．3．4．4 最适反应pH的测定 | 第36页 |
| 2．3．5 内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶的相互关系 | 第36-37页 |
| 2．3．5．1 两个组分相互关系的初步探索 | 第36-37页 |
| 2．3．5．2 β-葡萄糖苷酶对内切β-葡聚糖酶的协同作用动力学 | 第37页 |
| 2．3．5．3 内切β-葡聚糖酶对β-葡萄糖苷酶的抑制作用动力学 | 第37页 |
| 2．4 本研究实验流程 | 第37-39页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第39-68页 |
| 3．1 黑曲霉内切β-葡聚糖苷酶的分离、纯化 | 第39-46页 |
| 3．1．1 纤维素酶粉的初步分离——硫酸铵分级沉淀牙口G25脱盐 | 第39-41页 |
| 3．1．1．1 硫酸铵分级沉淀 | 第39-41页 |
| 3．1．1．2 Sephadex G25脱盐 | 第41页 |
| 3．1．2 DEAE-TOYOPEARL650M弱阴离子交换色谱初步纯化 | 第41-43页 |
| 3．1．3 DEAE重色谱纯化 | 第43-44页 |
| 3．1．4 P1'，组分的POROS 20PI高效液相色谱纯化 | 第44-45页 |
| 3．1．5 内切β-葡聚糖苷酶各步纯化的比活力和纯化倍数 | 第45-46页 |
| 3．2 内切β-葡聚糖苷酶P1”组分的表征 | 第46-54页 |
| 3．2．1 纯度鉴定与分子量标定 | 第46-49页 |
| 3．2．1．1 纯度鉴定 | 第46-48页 |
| 3．2．1．2 分子量标定 | 第48-49页 |
| 3．2．2 酶活力的测定和P1”组分的专一性 | 第49页 |
| 3．2．3 内切酶P1”的酶反应动力学分析 | 第49-53页 |
| 3．2．3．1 米氏常数（Km）与最大反应速度Vm的测定 | 第49-50页 |
| 3．2．3．2 水杨素对内切酶P1”的抑制作用 | 第50-51页 |
| 3．2．3．3 温度对酶活力的影响 | 第51-52页 |
| 3．2．3．4 pH对酶活力的影响 | 第52-53页 |
| 3．2．4 内切酶P1”的N-末端序列测定与分析 | 第53-54页 |
| 3．3 β-葡萄糖苷酶的纯化 | 第54-57页 |
| 3．3．1 DEAE-TOYOPEARL650M弱阴离子交换色谱初步纯化 | 第54-55页 |
| 3．3．2 bP1组分的DEAE高效液相色谱纯化 | 第55-57页 |
| 3．3．3 β-葡萄糖苷酶各步纯化的比活力和纯化倍数 | 第57页 |
| 3．4 β-葡萄糖苷酶bP1'组分的表征 | 第57-62页 |
| 3．4．1 纯度鉴定与分子量标定 | 第57-60页 |
| 3．4．1．1 纯度鉴定 | 第57-58页 |
| 3．4．1．2 分子量标定 | 第58-60页 |
| 3．4．2 bP1'组分的底物专一性 | 第60页 |
| 3．4．3 β-葡萄糖苷酶bP1'组分的酶反应动力学分析 | 第60-62页 |
| 3．4．3．1 米氏常数（Km）和最大反应速度（Vm）的测定 | 第60-61页 |
| 3．4．3．2 温度对bP1'组分酶活力的影响 | 第61页 |
| 3．4．3．3 pH对bP1'组分酶活力的影响 | 第61-62页 |
| 3．5 黑曲霉中的内切β-葡聚糖酶P1”组分与β-葡萄糖苷酶bp1'组分的相互关系 | 第62-68页 |
| 3．5．1 对两组分相互关系的初步探索 | 第62-63页 |
| 3．5．2 β-葡萄糖苷酶bP1'对内切酶PI的协同作用动力学 | 第63-65页 |
| 3．5．3 内切酶P1”对β-葡萄糖苷酶bP1'的抑制作用动力学 | 第65-66页 |
| 3．5．4 对黑曲霉纤维素酶系作用机制的探讨 | 第66-68页 |
| 第4章 总结与展望 | 第68-70页 |
| 4．1 总结 | 第68-69页 |
| 4．2 展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 附录A | 第77-83页 |
| 附录B | 第83-85页 |
