| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstarcts | 第6-13页 |
| 绪论 | 第13-51页 |
| 1． 抗体工程 | 第13-30页 |
| 1．1 天然抗体与基因工程抗体 | 第13-27页 |
| 1．2 基因工程抗体在临床上的应用 | 第27-30页 |
| 2． 乙型肝炎的研究现状和进展 | 第30-37页 |
| 2．1 HBV的生物学性状 | 第30-31页 |
| 2．2 关于HBV等蛋白质抗原的研究进展 | 第31-32页 |
| 2．3 HBV的抗原组成 | 第32-33页 |
| 2．4 HBV的变异 | 第33-34页 |
| 2．5 HBV致病机理 | 第34-35页 |
| 2．6 HBV传播途径 | 第35页 |
| 2．7 乙型肝炎的治疗进展 | 第35-37页 |
| 3． 本研究的设计思路 | 第37-39页 |
| 4． 本研究的具体工作内容及安排 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-51页 |
| 第一章 免疫细胞取材及RNA提取 | 第51-59页 |
| 1．1 材料方法 | 第51-55页 |
| 1．1．1 抗原及试剂 | 第51页 |
| 1．1．2 淋巴细胞来源 | 第51-52页 |
| 1．1．3 淋巴细胞分离 | 第52页 |
| 1．1．4 淋巴细胞培养及体外免疫 | 第52-53页 |
| 1．1．5 总RNA提取 | 第53-54页 |
| 1．1．6 RNA检测 | 第54-55页 |
| 1．2 结果与讨论 | 第55-56页 |
| 1．3 小结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
| 第二章 抗体基因片段的制备 | 第59-76页 |
| 2．1 材料和方法 | 第59-68页 |
| 2．1．1 酶和试剂 | 第59页 |
| 2．1．2 引物设计 | 第59-62页 |
| 2．1．3 RT-PCR扩增抗体重链、轻链基因 | 第62-64页 |
| 2．1．4 半套式PCR扩增V_H、V_L | 第64-65页 |
| 2．1．5 Linker设计及单链抗体（scFv）组装 | 第65-68页 |
| 2．2 结果与讨论 | 第68-74页 |
| 2．2．1 抗体基因片段的PCR扩增 | 第68-70页 |
| 2．2．2 Linker合成 | 第70-71页 |
| 2．2．3 天然抗体库中单链抗体基因的组装 | 第71-73页 |
| 2．2．4 两种scFv基因的组装方法的对比 | 第73-74页 |
| 2．3 小结 | 第74页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 第三章 人源单链抗体库的构建 | 第76-85页 |
| 3．1 材料和方法 | 第76-80页 |
| 3．1．1 载体、菌株和培养基 | 第76页 |
| 3．1．2 酶切 | 第76-77页 |
| 3．1．3 连接 | 第77页 |
| 3．1．4 电击感受态细胞制备 | 第77-78页 |
| 3．1．5 电击转化 | 第78页 |
| 3．1．6 库容量滴定 | 第78-79页 |
| 3．1．7 抗体库多样性的检测 | 第79-80页 |
| 3．2 结果 | 第80-81页 |
| 3．2．1 库容量滴定 | 第80页 |
| 3．2．2 多样性检测 | 第80-81页 |
| 3．3 讨论 | 第81-83页 |
| 3．4 小结 | 第83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 第四章 抗体库的淘选 | 第85-94页 |
| 4．1 材料和方法 | 第85-89页 |
| 4．1．1 试剂盒及培养基 | 第85-86页 |
| 4．1．2 淘选过程 | 第86-88页 |
| 4．1．3 多克隆ELISA | 第88页 |
| 4．1．4 单克隆ELISA | 第88-89页 |
| 4．2 结果和讨论 | 第89-93页 |
| 4．2．1 天然库及免疫库的淘选结果 | 第89-91页 |
| 4．2．2 单克隆ELISA结果 | 第91-92页 |
| 4．2．3 天然库和免疫库的对比 | 第92-93页 |
| 4．3 小结 | 第93页 |
| 参考文献 | 第93-94页 |
| 第五章 可溶性PreS1单链抗体的制备及鉴定 | 第94-111页 |
| 5．1 材料和方法 | 第94-100页 |
| 5．1．1 菌株和试剂和培养基 | 第94页 |
| 5．1．2 可溶性scFv的制备 | 第94-96页 |
| 5．1．3 SDS电泳 | 第96-97页 |
| 5．1．4 Western Blot | 第97-98页 |
| 5．1．5 ELISA | 第98页 |
| 5．1．6 竞争ELISA | 第98-99页 |
| 5．1．7 基因序列测定 | 第99-100页 |
| 5．2 结果 | 第100-107页 |
| 5．2．1 SDS电泳结果 | 第100-102页 |
| 5．2．2 Western Blot结果 | 第102页 |
| 5．2．3 ELISA和竞争ELISA结果 | 第102-104页 |
| 5．2．4 测序结果 | 第104-107页 |
| 5．3 讨论 | 第107-108页 |
| 5．4 小结 | 第108页 |
| 参考文献 | 第108-111页 |
| 第六章 单链抗体ZG1基因在大肠杆菌中的克隆、高效表达与分离纯化 | 第111-118页 |
| 6．1 材料和方法 | 第111-114页 |
| 6．1．1 菌种和质粒 | 第111页 |
| 6．1．2 酶、化学试剂和实验器材 | 第111-112页 |
| 6．1．3 表达载体的构建 | 第112-113页 |
| 6．1．4 单链抗体ZG1基因的表达 | 第113页 |
| 6．1．5 表达产物的纯化 | 第113-114页 |
| 6．1．6 SDS—PAGE | 第114页 |
| 6．1．7 ELISA | 第114页 |
| 6．2 结果 | 第114-116页 |
| 6．2．1 序列测定 | 第114页 |
| 6．2．2 SDS电泳 | 第114页 |
| 6．2．3 scFv的纯化 | 第114-115页 |
| 6．2．4 ELISA | 第115-116页 |
| 6．3 讨论 | 第116页 |
| 6．4 小结 | 第116-117页 |
| 参考文献 | 第117-118页 |
| 第七章 结论与展望 | 第118-121页 |
| 7．1 主要结论 | 第118-119页 |
| 7．2 创新点 | 第119-120页 |
| 7．3 展望 | 第120-121页 |
| 附录Ⅰ： ZG1表达载体的测序结果 | 第121-124页 |
| 附录Ⅱ： 作者在博士期间发表的文章及专利 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |