| 目录 | 第1-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-21页 |
| ·朊蛋白简介 | 第15页 |
| ·PrP在胞内能够提高细胞活性 | 第15-17页 |
| ·PRNP基因敲除(Prnp-/-)小鼠的海马神经细胞更易受凋亡和氧化应激因素的影响 | 第15-16页 |
| ·PrP的异常表达保护人的原代神经细胞免受Bax介导的细胞凋亡 | 第16-17页 |
| ·内源表达的PrP可抑制细胞凋亡 | 第17页 |
| ·PrP的神经保护性机制——阻止线粒体早期凋亡途径 | 第17页 |
| ·PrP在体外可以提高细胞活力 | 第17-18页 |
| ·PrP可以保护大脑免受Depple蛋白介导的细胞死亡的影响 | 第17页 |
| ·PrP阻止N端截短的PrP(PrPΔ32-134)介导的神经退化 | 第17-18页 |
| ·PrP59-91使细胞免受铜离子介导的神经毒性作用 | 第18页 |
| ·关于PrP的神经保护性功能的争议 | 第18-19页 |
| ·PrP在朊蛋白疾病中的神保护性功能 | 第19-20页 |
| ·小结 | 第20-21页 |
| 第二章 实验研究 | 第21-51页 |
| ·实验材料 | 第21-25页 |
| ·质粒 | 第21页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·细胞系 | 第21页 |
| ·工具酶和分子量标准 | 第21页 |
| ·试剂盒和其它主要化学试剂 | 第21-22页 |
| ·细菌和细胞培养基 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·常用的溶液、缓冲液 | 第23-25页 |
| ·试验方法 | 第25-34页 |
| ·去除N端和C端信号肽的胞浆PrP的PRNP基因及GFP基因的获得 | 第25-26页 |
| ·PCR及酶切产物的回收 | 第26页 |
| ·克隆载体的构建 | 第26-27页 |
| ·重组体的筛选和鉴定 | 第27页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第27页 |
| ·pcDNA3.1(zero+)空载体及pcONA3.1-huCytoPrP、pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.1-huPrP1-253真核表达载体质粒的大量提取纯化 | 第27-28页 |
| ·细胞的复苏 | 第28页 |
| ·细胞的传代 | 第28页 |
| ·脂质体介导SH-SYSY细胞的瞬时转染 | 第28-29页 |
| ·间接免疫荧光鉴定转染后重组PrP蛋白的表达情况 | 第29页 |
| ·Western blot检测转染后重组PrP蛋白的表达情况 | 第29-30页 |
| ·MTT方法分析胞浆表达CytoPrP对细胞生长的影响 | 第30页 |
| ·Trypan blue法检测细胞死亡百分比 | 第30页 |
| ·JC-1染色分析线粒体膜电位ψm的变化 | 第30页 |
| ·Annexin V/PI双染检测细胞早期凋亡 | 第30-31页 |
| ·DNA末端原位标记染色法(TUNEL) | 第31页 |
| ·DNA Ladder检测 | 第31-32页 |
| ·caspase-3活性的检测 | 第32页 |
| ·表达CytoPrP的SH-SY5Y细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的检测 | 第32页 |
| ·谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性检测 | 第32页 |
| ·过氧化氢酶(catalase)活性的检测 | 第32-34页 |
| ·实验结果 | 第34-47页 |
| ·胞浆中CytoPrP真核表达质粒的构建 | 第34页 |
| ·PrP1-253及CytoPrP在细胞内的不同表达形式 | 第34-36页 |
| ·胞浆CytoPrP蛋白具有较强的PK抗性 | 第36页 |
| ·CytoPrP的存在可诱导显著的细胞毒性效应 | 第36-38页 |
| ·CytoPrP对SH-SY5Y细胞形变化变的影响 | 第38页 |
| ·CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响 | 第38-39页 |
| ·CytoPrP诱导SH-SY5Y细胞的早期凋亡 | 第39-40页 |
| a CytoPrP对线粒体膜电位ψm的影响 | 第39-40页 |
| b Caspase家族成员参与CytoPrP蛋白诱导的细胞凋亡 | 第40页 |
| ·CytoPrP诱导SH-SY5Y细胞的晚期凋亡 | 第40-44页 |
| a Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡 | 第40-42页 |
| b CytoPrP表达对SH-SY5Y细胞染色质DNA的影响 | 第42-43页 |
| c 原位标记染色法检测的细胞凋亡(TUNEL) | 第43-44页 |
| ·Bcl-2水平在CytoPrP表达的细胞中降低 | 第44-45页 |
| ·表达CytoPrP的SH-SY5Y细胞过氧化氢酶水平降低,谷胱甘肽还原酶不变 | 第45-47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| 第三章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-70页 |
| 附录1.SCI文章(第一作者,附摘要) | 第58-61页 |
| 附录2.英文缩略词及英、汉对照 | 第61-63页 |
| 附录3.胞浆CytoPrP aa23-230基因序列测序结果 | 第63-64页 |
| 附录4.硕士期间的其它研究成果 | 第64-70页 |
| 致谢 | 第70-72页 |
| 攻读硕士期间发表的SCI及中文期刊论文 | 第72-74页 |
