| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一部分 C5AR 真核表达载体的构建及其表达株的建立 | 第12-30页 |
| 1 前言 | 第12页 |
| 2 材料 | 第12-16页 |
| ·主要试剂 | 第12-13页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第13-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·载体、细菌菌株、细胞株及实验动物 | 第15-16页 |
| ·引物设计 | 第16页 |
| 3 方法 | 第16-24页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR 扩增 C5aR 基因 | 第17-18页 |
| ·回收目的 DNA | 第18页 |
| ·连接反应 | 第18-19页 |
| ·转化 | 第19页 |
| ·挑取及鉴定克隆 | 第19页 |
| ·质粒提取及酶切鉴定 | 第19-20页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第20-21页 |
| ·悬浮细胞的电转条件的选择 | 第21-22页 |
| ·人 C5a 受体瞬时转染表达的 FACS 检测 | 第22-24页 |
| 4 结果 | 第24-27页 |
| ·RT-PCR 扩增C5AR 全长基因 | 第24页 |
| ·靶基因序列测定真核表达载体的构建 | 第24-25页 |
| ·真核表达质粒的转染 | 第25-26页 |
| ·人C5A 受体瞬时转染表达的FACS 的结果 | 第26-27页 |
| 5 讨论 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-30页 |
| 第二部分 人补体C5A 受体稳定表达细胞株的筛选与鉴定 | 第30-46页 |
| 1 前言 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-35页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| 3 结果 | 第35-42页 |
| ·细胞株的选择 | 第35-36页 |
| ·MOLT-4 细胞对ZEOCIN 的敏感性选择 | 第36-37页 |
| ·稳定株的鉴定 | 第37-40页 |
| ·钙离子浓度流动情况检测 | 第40-41页 |
| ·小鼠肺灌洗液的流式检测 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 6 参考文献 | 第44-46页 |
| 综述 | 第46-55页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 主要缩略语 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 附录 | 第59页 |