| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-22页 |
| 第1章 绪论 | 第22-49页 |
| ·引言 | 第22-23页 |
| ·毒理学的发展 | 第23-24页 |
| ·定义 | 第23页 |
| ·发展历史简介 | 第23页 |
| ·剂量-反应关系 | 第23-24页 |
| ·金属毒理 | 第24页 |
| ·氧化应激 | 第24-30页 |
| ·概念 | 第24-25页 |
| ·活性氧化物质(ROS) | 第25-27页 |
| ·羟基自由基(OH) | 第27-28页 |
| ·Fenton反应及维他命C(L-Ascorbic acid) | 第28-30页 |
| ·电子自旋共振法 | 第30-32页 |
| ·形成与发展 | 第30页 |
| ·分析原理 | 第30-31页 |
| ·常用捕捉剂 | 第31-32页 |
| ·柔性金属 | 第32-38页 |
| ·概念 | 第32页 |
| ·铜 | 第32-34页 |
| ·化学性质 | 第33页 |
| ·环境中来源及生物双重作用 | 第33页 |
| ·生物功能 | 第33页 |
| ·微生物的防御机制 | 第33-34页 |
| ·银 | 第34-35页 |
| ·化学性质 | 第34页 |
| ·来源及对微生物的毒性 | 第34-35页 |
| ·微生物的防御机制 | 第35页 |
| ·汞 | 第35-36页 |
| ·化学性质 | 第35页 |
| ·来源及对生物的毒性 | 第35-36页 |
| ·微生物的防御机制 | 第36页 |
| ·镉 | 第36-37页 |
| ·化学性质 | 第36页 |
| ·来源及生物毒性 | 第36-37页 |
| ·微生物的防御机制 | 第37页 |
| ·锌 | 第37-38页 |
| ·化学性质 | 第37页 |
| ·来源及对微生物的双重作用 | 第37-38页 |
| ·微生物的平衡体系 | 第38页 |
| ·柔性金属对微生物毒性分子机理研究现状 | 第38-39页 |
| ·铁硫簇脱水酶及其功能和组合方法 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌 | 第40页 |
| ·论文立题依据及研究内容 | 第40-44页 |
| ·立题依据 | 第40-41页 |
| ·研究内容及意义 | 第41-42页 |
| ·技术路线 | 第42-43页 |
| ·创新点 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 第2章 金属对大肠杆菌的氧化应激效应 | 第49-82页 |
| ·前言 | 第49-50页 |
| ·实验材料、仪器 | 第50-52页 |
| ·使用菌株 | 第50页 |
| ·所用试剂及培养基制备 | 第50-52页 |
| ·实验仪器 | 第52页 |
| ·实验方法 | 第52-56页 |
| ·细菌的培养 | 第52-53页 |
| ·细菌存活率分析 | 第53页 |
| ·细菌死亡速度常数计算方法 | 第53-54页 |
| ·L-AscA降解速度分析 | 第54页 |
| ·电子显微镜观察细菌形态 | 第54页 |
| ·ESR测定羟基自由基浓度 | 第54-55页 |
| ·羟基自由基浓度的计算方法 | 第55-56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-80页 |
| ·Cu(Ⅱ)和L-AscA体系对E. coli的致死率分析 | 第56-60页 |
| ·初期菌体浓度范围确定 | 第56-57页 |
| ·Cu(Ⅱ)单独作用 | 第57-58页 |
| ·L-AscA单独作用 | 第58-59页 |
| ·Cu(Ⅱ)和L-AscA单独与共同作用比较 | 第59-60页 |
| ·Cu(Ⅱ)/L-AscA共存体系对E. coli毒性的影响因素分析 | 第60-62页 |
| ·Cu(Ⅱ)浓度变化的影响 | 第60-61页 |
| ·L-AscA浓度变化的影响 | 第61-62页 |
| ·Cu(Ⅱ)和L-AscA共存对其它分离出的菌株的作用 | 第62-68页 |
| ·France庭园池水中分离出的菌体SEM形态观察和鉴别 | 第62-66页 |
| ·对分离菌株的毒性作用 | 第66-68页 |
| ·Cu(Ⅱ)、Fe(Ⅲ)、Cr(Ⅲ)±L-AscA作用比较 | 第68-70页 |
| ·各金属存在条件下L-AscA降解速率分析 | 第70-71页 |
| ·Cr(Ⅲ)毒性分析 | 第71-72页 |
| ·ESR测定羟基自由基浓度 | 第72-80页 |
| ·本章小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-82页 |
| 第3章 柔性金属对大肠杆菌的抑制作用分析 | 第82-98页 |
| ·前言 | 第82页 |
| ·实验材料与方法 | 第82-86页 |
| ·相关菌株 | 第82页 |
| ·实验试剂 | 第82-83页 |
| ·实验仪器 | 第83页 |
| ·培养基的制备 | 第83-85页 |
| ·大肠杆菌的培养方法 | 第85-86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-95页 |
| ·低菌体浓度下各金属对E.coli的抑制作用 | 第86-88页 |
| ·Ag(Ⅰ)对大肠杆菌抑制作用的影响因素 | 第88-95页 |
| ·好氧、厌氧状态影响 | 第88-89页 |
| ·不同培养基的影响 | 第89-90页 |
| ·菌体浓度的影响 | 第90-91页 |
| ·附加氨基酸的影响 | 第91-92页 |
| ·copA蛋白的作用 | 第92-95页 |
| ·本章小结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-98页 |
| 第4章 柔性金属对细胞体外铁-硫簇脱水酶的作用 | 第98-131页 |
| ·前言 | 第98-99页 |
| ·材料与方法 | 第99-112页 |
| ·主要试剂 | 第99-100页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第100页 |
| ·E.coli粗提液的制备及活性分析 | 第100-101页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第101-102页 |
| ·fumA提纯 | 第102-109页 |
| ·试剂和材料 | 第102页 |
| ·提纯相关仪器设备 | 第102页 |
| ·缓冲液配置及提纯柱 | 第102-104页 |
| ·菌株及培养方法 | 第104-105页 |
| ·fumA提纯步骤 | 第105-108页 |
| ·fumA活性分析 | 第108页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第108页 |
| ·十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第108-109页 |
| ·金属对纯化fumA的作用分析 | 第109-111页 |
| ·EPR失活酶结构分析 | 第111-112页 |
| ·结果与讨论 | 第112-129页 |
| ·Ag(Ⅰ)对粗提液中延胡索酸酶的作用 | 第112-114页 |
| ·Ag(Ⅰ)浓度对fumA活性的影响 | 第112-113页 |
| ·Ag(Ⅰ)对fumA的作用随时间的变化 | 第113-114页 |
| ·fumA提纯结果 | 第114-121页 |
| ·硫酸精蛋白处理 | 第114-115页 |
| ·DEAE Sepharose阴离子交换柱处理 | 第115-116页 |
| ·Phenyl-sepharose柱处理及浓缩 | 第116-117页 |
| ·Superdex-200柱处理及浓缩 | 第117-118页 |
| ·SDS-PAGE蛋白纯度确认 | 第118-119页 |
| ·纯化结果小结 | 第119-121页 |
| ·金属对纯化fumA的作用 | 第121-129页 |
| ·各金属对纯化fumA活性的影响 | 第121-123页 |
| ·L-malate对fumA的底物保护分析 | 第123-125页 |
| ·失活后fumA的活性还原 | 第125-126页 |
| ·失活fumA中的铁-硫簇结构分析(EPR/ESR) | 第126-127页 |
| ·Fe原子释放分析 | 第127-128页 |
| ·Ag(Ⅰ)、Hg(Ⅱ)、Cd(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)使fumA失活过程小结 | 第128-129页 |
| ·本章小结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-131页 |
| 第5章 柔性金属对活体细胞内酶的作用 | 第131-154页 |
| ·前言 | 第131页 |
| ·实验材料与方法 | 第131-141页 |
| ·试剂 | 第131页 |
| ·主要实验仪器设备 | 第131-132页 |
| ·培养基及相关溶剂组分 | 第132-133页 |
| ·菌株 | 第133-135页 |
| ·PCR鉴定FX10突变菌株 | 第135页 |
| ·金属对细胞体内酶活性的影响(in vivo) | 第135-141页 |
| ·对含[4Fe-4S]簇酶的作用(fumarase,IPMI,Edd) | 第136-138页 |
| ·对不含[4Fe-4S]簇酶的作用 | 第138-140页 |
| ·对铁-硫簇组装(Isc)系统作用分析 | 第140-141页 |
| ·结果与讨论 | 第141-150页 |
| ·高菌体浓度下Ag(Ⅰ)、Hg(Ⅱ)、Cd(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)对E.coli的抑制作用 | 第141-142页 |
| ·对含有[4Fe-4S]簇的酶活性的影响 | 第142-143页 |
| ·对其它类型酶活性的影响 | 第143-145页 |
| ·对铁-硫簇组装系统的作用 | 第145-147页 |
| ·zntA蛋白对Zn耐受作用 | 第147-150页 |
| ·综合讨论 | 第150-152页 |
| ·本章小结 | 第152-153页 |
| 参考文献 | 第153-154页 |
| 第6章 总结与展望 | 第154-158页 |
| ·总结 | 第154-157页 |
| ·研究展望 | 第157-158页 |
| 攻读博士学位期间研宄成果 | 第158-159页 |
| 致谢 | 第159页 |
