| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 概论 | 第12-23页 |
| 第1节 IFN-γ的发现与结核病的关系 | 第13-14页 |
| 1 IFN-γ的发现 | 第13-14页 |
| 2 IFN-γ与结核病 | 第14页 |
| 第2节 结核分枝杆菌抗原的细胞递呈及IFN-γ的产生 | 第14-17页 |
| 1 结核分枝杆菌抗原的细胞递呈过程 | 第14-17页 |
| ·CD4~+T细胞 | 第16页 |
| ·CD8~+T细胞 | 第16页 |
| ·非常规T细胞的免疫反应 | 第16-17页 |
| 2 IFN-γ的产生 | 第17页 |
| 第3节 利用免疫细胞体外释放IFN-γ实验来诊断结核感染 | 第17-19页 |
| 第4节 现有的结核诊断方法的横向比较及完成本研究的重要性与必要性 | 第19-23页 |
| 1 目前已有的结核诊断方法比较: | 第19-21页 |
| 2 在我国进一步深入研究该项技术的重要性及必要性 | 第21-22页 |
| 3 该研究的主要技术方法及技术路径 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-37页 |
| 第一节 材料 | 第23-27页 |
| 1 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 3 常用试剂的配制 | 第24-27页 |
| 第二节 方法 | 第27-37页 |
| 1 基因克隆 | 第27-30页 |
| 2 工程菌的大量表达 | 第30页 |
| 3 SDS-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS—PAGE)见《分子克隆实验指南》第二版。 | 第30页 |
| 4 包涵体的洗涤纯化 | 第30-31页 |
| 5 蛋白复性方法——透析复性 | 第31页 |
| 6 重组蛋白的柱层析HPLC纯化方法 | 第31页 |
| 7 NTA-Ni+亲和法纯化蛋白 | 第31-32页 |
| 8 蛋白胶SDS-PAGE银染 | 第32页 |
| 9 样品检测 | 第32-33页 |
| 10 小鼠的免疫与鼠源单克隆抗体的制备 | 第33-35页 |
| 11 鲎试剂检测内毒素 | 第35-36页 |
| 12 ELISPOT试验 | 第36页 |
| 13 统计分析 | 第36-37页 |
| 第三章 结果与分析 | 第37-58页 |
| 第一节 结核新型管式培养系统诊断试剂的建立 | 第37-50页 |
| 1 特异性蛋白ESAT-6、CFP-10的基因克隆与表达纯化 | 第37-42页 |
| ·PCR引物的设计 | 第37页 |
| ·表达载体的克隆 | 第37-38页 |
| ·蛋白的表达与纯化 | 第38-41页 |
| ·ESAT-6的表达与纯化 | 第38-39页 |
| ·CFP-10的纯化 | 第39-41页 |
| ·蛋白的纯度及内毒素的控制 | 第41页 |
| ·ESAT-6与CFP-10的活性鉴定 | 第41-42页 |
| 2 培养条件的摸索 | 第42-44页 |
| ·培养方式 | 第42-44页 |
| ·最佳蛋白使用浓度的选择 | 第44页 |
| 3 ELISA定量IFN-γ试剂盒的构建 | 第44-50页 |
| ·人IFN-γ鼠源克隆抗体的制备 | 第44-47页 |
| ·试剂盒调整及优化 | 第47-50页 |
| 4 小结 | 第50页 |
| 第二节 TB-IGRA试剂的临床应用与结果分析 | 第50-58页 |
| 1 本试剂盒临界值(Cut Off值)的确定 | 第50-52页 |
| 2 本试剂TB-IGRA在肺外结核病人中的结果 | 第52-53页 |
| 3 结核病人接受治疗后不同时间TB-IGRA结果分析 | 第53-54页 |
| 4 TB-IGRA用于提示个体接触结核的风险 | 第54-55页 |
| 5 TB-IGRA对亚临床结核感染的筛查 | 第55-57页 |
| 6 小结 | 第57-58页 |
| 第四章 讨论 | 第58-64页 |
| 1 结核IFN-γ体外释放实验(TB-IGRA)对结核感染的诊断价值 | 第58-61页 |
| ·TB-IGRA的出现及发展 | 第58-59页 |
| ·结核体外IFN-γ释放实验在特殊人群中的检测情况 | 第59-60页 |
| ·结核体外IFN-γ释放实验结果随病情发展的动态变化 | 第60-61页 |
| ·TB-IGRA结果同结核接触程度呈正相关 | 第61页 |
| 2 寻找新的刺激蛋白 | 第61-63页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白 | 第61-62页 |
| ·现有的研究结果及未来的热点 | 第62-63页 |
| 3 寻找新的检测手段——用IP-10代替IFN-γ | 第63-64页 |
| 第五章 总结与展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 在学期间发表的论文 | 第71页 |
