| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·病原学 | 第12-14页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现 | 第12页 |
| ·基本特征 | 第12-13页 |
| ·几种主要的毒力相关因子 | 第13-14页 |
| ·流行病学 | 第14-15页 |
| ·信号标签诱导技术的研究进展 | 第15-20页 |
| ·转座子 | 第15页 |
| ·标签 | 第15-16页 |
| ·负向选择系统 | 第16页 |
| ·检测方法 | 第16页 |
| ·应用STM 所鉴定的毒力基因 | 第16-20页 |
| ·研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-32页 |
| ·试验材料 | 第21-22页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·试验试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-32页 |
| ·寡核苷酸标签和引物 | 第22-23页 |
| ·寡核苷酸标签的双链合成、酶切与回收 | 第23-24页 |
| ·载体的线性化和去磷酸化 | 第24页 |
| ·12 标签分别与载体的连接及连接产物的纯化 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌β2155 电转化感受态细胞的制备及连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的PCR、测序鉴定 | 第26页 |
| ·12 个引物F 与12 个重组质粒上标签的PCR 特异性验证 | 第26-27页 |
| ·转座突变体库的构建和体外筛选 | 第27页 |
| ·接合子氨苄青霉素抗性的测定 | 第27页 |
| ·转座突变株的PCR 鉴定 | 第27-28页 |
| ·接种库接种BALB/C 小鼠 | 第28页 |
| ·小鼠肺脏回收菌及总基因组的提取 | 第28-29页 |
| ·总基因组ApxIV 特异引物和F 特异引物鉴定 | 第29页 |
| ·体内回收阴性菌单独接种BALB/C 小鼠 | 第29页 |
| ·调取阴性菌基因组中插入标签侧翼序列 | 第29-32页 |
| 3 结果 | 第32-53页 |
| ·载体的处理 | 第32页 |
| ·12 个重组质粒的标签引物PCR 鉴定结果和测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·12 个引物F 与12 个重组质粒上特异标签的PCR 特异性验证结果 | 第33-35页 |
| ·转座突变体库的构建和体外筛选结果 | 第35页 |
| ·接合子氨苄抗性的测定结果 | 第35-36页 |
| ·12 个库中第三代突变株PCR 测定结果 | 第36-50页 |
| ·F 特异引物PCR 鉴定结果 | 第36-43页 |
| ·ApxIV 特异引物PCR 鉴定结果 | 第43-50页 |
| ·供体菌与受体菌的接合效率 | 第50页 |
| ·混合接种库接种后回收时间的确定 | 第50-51页 |
| ·回收菌总基因组 ApxIV 引物 PCR 鉴定结果 | 第51页 |
| ·回收菌总基因组F 特异引物PCR 鉴定结果 | 第51-52页 |
| ·回收阴性菌单独接种BALB/C 小鼠的回收情况 | 第52页 |
| ·回收阴性菌基因组步移PCR 扩增结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·关于信号标签诱导技术 | 第53页 |
| ·关于自杀载体和转座子 | 第53-54页 |
| ·关于重组质粒的鉴定 | 第54页 |
| ·关于接合转移方法 | 第54-55页 |
| ·供体菌和受体菌的生长状态 | 第54页 |
| ·供体菌和受体菌的比例 | 第54-55页 |
| ·接合培养时间 | 第55页 |
| ·关于突变株的传代和筛选 | 第55页 |
| ·关于小鼠体内筛选突变体 | 第55-57页 |
| ·感染剂量 | 第55-56页 |
| ·感染时间 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 附录 12 个重组质粒特异标签 PCR 产物的测序结果 | 第65-69页 |
