| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.引言 | 第10页 |
| 2.生防芽孢杆菌抗菌防病的分子机制 | 第10-13页 |
| ·竞争作用 | 第11页 |
| ·拮抗作用 | 第11-12页 |
| ·诱导抗性作用 | 第12-13页 |
| 3.芽孢杆菌内含大质粒的抑菌抗病活性等特异性功能 | 第13页 |
| 4.生防菌拮抗基因国内外研究进展 | 第13-14页 |
| 5.已知基因片段旁侧基因序列的获取方法 | 第14-19页 |
| ·锚定PCR(anchored PCR) | 第14-15页 |
| ·反向PCR(I-PCR) | 第15-16页 |
| ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第16-19页 |
| 6.研究的目的意义 | 第19-20页 |
| 7.技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 DJ-T02片段侧翼未知序列的TAIL-PCR扩增 | 第21-36页 |
| 1.材料与方法 | 第21-27页 |
| ·供试材料 | 第21-22页 |
| ·菌株与DJ-T02片段的获取 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22页 |
| ·主要化学试剂 | 第22页 |
| ·主要工具酶及缓冲液: | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·野生型Bacillus cereus B-02基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·TAIL-PCR方法扩增DJ-T02片段的侧翼序列 | 第23-27页 |
| 2.结果与分析 | 第27-35页 |
| ·野生型Bacillus cereus B-02基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·DJ-02侧翼序列的扩增 | 第27-29页 |
| ·TAIL-PCR扩增产物的回收 | 第29页 |
| ·TAIL-PCR产物的测序 | 第29-32页 |
| ·DJ-T02的5′端侧翼序列的测序 | 第29-30页 |
| ·DJ-T02的3′端侧翼序列的测序 | 第30页 |
| ·剪切拼接后的完整序列 | 第30-32页 |
| ·扩增DNA序列MZ-BcP的生物信息学分析 | 第32-35页 |
| ·总ORF: | 第32-33页 |
| ·ORF(585 bp)翻译后蛋白序列分析 | 第33-35页 |
| 3.讨论与小结 | 第35-36页 |
| 第三章 相关复制蛋白基因的扩增及重组表达载体的构建 | 第36-48页 |
| 1.供试材料 | 第36-37页 |
| ·菌株与载体 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·主要仪器与试剂 | 第37页 |
| 2.实验方法 | 第37-43页 |
| ·ORF(585 bp)的扩增 | 第37-38页 |
| ·引物设计 | 第37-38页 |
| ·普通PCR反应体系及反应条件 | 第38页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第38页 |
| ·重组载体的构建及转化 | 第38-42页 |
| ·pET-32a(+)质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·回收PCR产物的双酶切 | 第39-40页 |
| ·pET-32a(+)的双酶切 | 第40页 |
| ·双酶切产物的连接 | 第40页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第40-41页 |
| ·转化产物菌落PCR检测及测序 | 第41-42页 |
| ·Bacillus cereus B-02质粒的提取及585 bp ORF扩增 | 第42-43页 |
| ·Bacillus cereus B-02质粒的提取 | 第42页 |
| ·ORF(585 bp)扩增 | 第42-43页 |
| 3.结果与分析 | 第43-46页 |
| ·相关复制蛋白基因的PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第43-44页 |
| ·PCR产物及pET-32a(+)载体双酶切分析 | 第44页 |
| ·重组载体菌落PCR检测结果及测序结果 | 第44-45页 |
| ·pET-32a(+)与目的片段克隆重组载体的构建 | 第45页 |
| ·Bacillus cereus B-02质粒的提取及ORF(585 bp)扩增 | 第45-46页 |
| 4.讨论与小结 | 第46-48页 |
| 第四章 重组表达载体的诱导表达及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-53页 |
| 1.供试材料 | 第48-49页 |
| ·菌株及载体 | 第48页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·分离胶、浓缩胶的配制体 | 第48-49页 |
| ·试剂配制 | 第49页 |
| 2.实验方法 | 第49-51页 |
| ·重组载体pET-32a(+)-MZF585转化E.coli BL21(DE_3) | 第49页 |
| ·pET-32a(+)-MZF585在E.coliBL21(DE_3)中的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·IPTG化学诱导原理 | 第50页 |
| ·IPTG化学诱导 | 第50页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第50-51页 |
| ·分离胶的灌制 | 第50-51页 |
| ·浓缩胶的灌制 | 第51页 |
| ·标准蛋白质样品的制备 | 第51页 |
| ·待测蛋白质样品的制备 | 第51页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51页 |
| ·染色与脱色 | 第51页 |
| 3.结果与分析 | 第51-52页 |
| 4.讨论与小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 本研究创新点 | 第54-55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第62-63页 |
| 在学期间参加的学术会议及其他 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64页 |
