| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-36页 |
| ·课题背景 | 第14-15页 |
| ·课题来源 | 第14页 |
| ·研究的目的和意义 | 第14-15页 |
| ·氢能发展及生物制氢技术 | 第15-18页 |
| ·氢的制取方法 | 第16页 |
| ·生物制氢技术 | 第16-18页 |
| ·发酵法生物制氢研究现状 | 第18-32页 |
| ·混合培养产氢发酵研究 | 第18-19页 |
| ·分子生态学技术手段的应用 | 第19-25页 |
| ·纯培养产氢发酵研究 | 第25-27页 |
| ·产氢代谢途径研究 | 第27-29页 |
| ·氢化酶研究与代谢调控 | 第29-31页 |
| ·目前研究存在的问题 | 第31-32页 |
| ·产乙醇杆菌研究现状 | 第32-34页 |
| ·哈尔滨产乙醇杆菌 | 第32页 |
| ·关键功能基因的克隆与表达 | 第32-33页 |
| ·产氢条件优化研究 | 第33-34页 |
| ·研究中亟待解决的关键问题 | 第34页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第34-36页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第36-54页 |
| ·实验菌株 | 第36页 |
| ·实验试剂与仪器设备 | 第36-41页 |
| ·主要试剂 | 第36-39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·间歇实验装置 | 第40-41页 |
| ·培养基及培养条件 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-54页 |
| ·核酸纯化与克隆 | 第42-45页 |
| ·生物信息学与统计学分析 | 第45-46页 |
| ·分子生物学分析 | 第46-49页 |
| ·异源表达分析 | 第49-51页 |
| ·氢化酶活性分析 | 第51-52页 |
| ·Real-Time qRT-PCR 操作 | 第52-54页 |
| 第3章 基于氢化酶基因的群落结构分析 | 第54-77页 |
| ·引言 | 第54-55页 |
| ·氢化酶兼并引物特征分析 | 第55页 |
| ·对纯培养细菌氢化酶的扩增效率分析 | 第55-56页 |
| ·不同产氢发酵类型群落差异分析 | 第56-76页 |
| ·混合产氢菌群富集条件 | 第56-57页 |
| ·16S rRNA 克隆文库构建与分析 | 第57-60页 |
| ·氢化酶克隆文库构建与分析 | 第60-72页 |
| ·扩增准确率分析 | 第72-76页 |
| ·本章小结 | 第76-77页 |
| 第4章 哈尔滨产乙醇杆菌YUAN-3 氢化酶的克隆与异源表达 | 第77-98页 |
| ·引言 | 第77-78页 |
| ·菌株YUAN-3 氢化酶的克隆 | 第78-84页 |
| ·氢化酶全长的获得 | 第78-80页 |
| ·氢化酶全长的验证 | 第80页 |
| ·氢化酶序列分析 | 第80-84页 |
| ·菌株YUAN-3 氢化酶亲缘性与保守区域分析 | 第84-89页 |
| ·氢化酶亲缘性分析 | 第84-85页 |
| ·氢化酶保守区域分析 | 第85-89页 |
| ·菌株YUAN-3 氢化酶基因的异源表达 | 第89-96页 |
| ·氢化酶异源表达载体构建 | 第89-92页 |
| ·异源表达条件优化 | 第92-93页 |
| ·表达质粒验证 | 第93-94页 |
| ·超量表达蛋白纯化 | 第94-95页 |
| ·氢化酶活性分析 | 第95-96页 |
| ·本章小结 | 第96-98页 |
| 第5章 金属离子和L-半胱氨酸对YUAN-3 产氢代谢功能酶基因的表达影响 | 第98-127页 |
| ·引言 | 第98-99页 |
| ·产氢功能酶基因标准质粒构建 | 第99-110页 |
| ·总RNA 提取条件优化 | 第99-102页 |
| ·氢化酶基因标准质粒构建 | 第102-103页 |
| ·乙酸激酶基因标准质粒构建 | 第103页 |
| ·乙醇脱氢酶基因标准质粒构建 | 第103页 |
| ·乳酸脱氢酶基因标准质粒构建 | 第103-110页 |
| ·亚铁离子对菌株YUAN-3 的影响分析 | 第110-112页 |
| ·亚铁离子对YUAN-3 生长和产氢的影响 | 第110-111页 |
| ·亚铁离子对YUAN-3 产氢代谢功能酶基因表达的影响 | 第111-112页 |
| ·镁离子对菌株YUAN-3 的影响分析 | 第112-116页 |
| ·镁离子对YUAN-3 生长和产氢的影响 | 第112-114页 |
| ·镁离子对YUAN-3 产氢代谢功能酶基因表达的影响 | 第114-116页 |
| ·L-半胱氨酸对菌株YUAN-3 的影响分析 | 第116-118页 |
| ·L-半胱氨酸对YUAN-3 生长和产氢的影响 | 第116-117页 |
| ·L-半胱氨酸对YUAN-3 产氢代谢功能酶基因表达的影响 | 第117-118页 |
| ·金属离子和L-半胱氨酸对两类发酵产氢细菌影响比较 | 第118-125页 |
| ·拜氏梭菌RZF-1108 的生长特性 | 第118-120页 |
| ·亚铁离子对两株细菌产氢和氢化酶表达影响的比较 | 第120-121页 |
| ·镁离子对两株细菌产氢和氢化酶表达影响的比较 | 第121-123页 |
| ·L-半胱氨酸对两株细菌产氢和氢化酶表达影响的比较 | 第123-125页 |
| ·本章小结 | 第125-127页 |
| 结论 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-144页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文及其它成果 | 第144-148页 |
| 致谢 | 第148-150页 |
| 个人简历 | 第150-151页 |
