| 缩略语表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Summary | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·水稻耐冷分子机制研究进展 | 第10-14页 |
| ·植物低温逆境蛋白的研究进展 | 第11-13页 |
| ·植物低温逆境下基因表达谱分析 | 第13-14页 |
| ·水稻耐冷基因的研究进展 | 第14-15页 |
| ·水稻耐冷基因定位 | 第14-15页 |
| ·水稻耐冷基因克隆 | 第15页 |
| ·RNAi及基因过表达技术 | 第15-19页 |
| ·RNAi技术 | 第15-17页 |
| ·基因过表达技术 | 第17-19页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第19-21页 |
| ·农杆菌介导法的原理 | 第19页 |
| ·农杆菌介导转化水稻研究进展 | 第19-20页 |
| ·农杆菌介导转化水稻的关键因素 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 水稻OsCOI基因过表达载体的构建 | 第22-37页 |
| ·材料和方法 | 第22-29页 |
| ·植物材料、菌种及质粒 | 第22页 |
| ·酶及试剂 | 第22页 |
| ·细菌培养基 | 第22-23页 |
| ·引物 | 第23页 |
| ·水稻叶片DNA的提取 | 第23页 |
| ·PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·目的DNA片段的回收 | 第24页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·加“A”反应与连接反应 | 第25页 |
| ·大肠杆菌转化 | 第25-26页 |
| ·蓝白斑筛选阳性克隆及质粒提取 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定与测序 | 第27页 |
| ·序列比对 | 第27页 |
| ·OsCOI 基因植物过表达载体构建 | 第27-28页 |
| ·根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·含OsCOI 过表达重组质粒的农杆菌的获得 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-35页 |
| ·OsCOI基因cDNA的扩增 | 第29-30页 |
| ·TEasy-OsCOI的酶切验证 | 第30页 |
| ·OsCOI基因植物过表达载体pAHLG-OsCOI的酶切验证 | 第30-31页 |
| ·OsCOI基因的序列 | 第31-32页 |
| ·OsCOI基因的比对及蛋白质结构预测分析 | 第32-34页 |
| ·含有过表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·水稻OsCOI基因cDNA的克隆 | 第35页 |
| ·水稻OsCOI基因的比对分析 | 第35-36页 |
| ·水稻OsCOI基因的过表达载体构建 | 第36页 |
| ·含有过表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第36-37页 |
| 第三章 水稻OsCOI基因RNAi表达载体的构建 | 第37-47页 |
| ·材料和方法 | 第37-42页 |
| ·菌种及质粒 | 第37页 |
| ·酶及试剂 | 第37-38页 |
| ·引物 | 第38页 |
| ·PCR扩增 | 第38页 |
| ·pEASY-OsCOIRNi连接与转化大肠杆菌 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的酶切鉴定与测序 | 第39页 |
| ·序列比对 | 第39页 |
| ·RNA 干扰表达载体构建 | 第39-42页 |
| ·RNAi 重组质粒的农杆菌的获得 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-45页 |
| ·OsCOIRNi片段的扩增 | 第42页 |
| ·pEASY-OsCOIRNi的酶切验证 | 第42-43页 |
| ·RNAi中间载体p1300-OsCOIRNi1的酶切验证 | 第43页 |
| ·RNAi表达载体p1300-OsCOIRNi1/2的酶切验证 | 第43-44页 |
| ·OsCOIRNi片段的序列 | 第44页 |
| ·含RNAi表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·OsCOIRNi片段的扩增 | 第45页 |
| ·载体pEASY-OsCOIRNi的构建 | 第45-46页 |
| ·RNAi 表达载体p1300-OsCOIRNi1/2的构建 | 第46页 |
| ·含RNAi表达重组质粒的农杆菌阳性克隆的鉴定 | 第46-47页 |
| 第四章 农杆菌介导的遗传转化 | 第47-58页 |
| ·材料和方法 | 第47-52页 |
| ·植物材料、菌种及质粒 | 第47-48页 |
| ·酶及试剂 | 第48页 |
| ·引物 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化方法 | 第49-51页 |
| ·转基因水稻的PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-55页 |
| ·水稻愈伤组织的诱导 | 第52页 |
| ·抗性愈伤组织的筛选 | 第52页 |
| ·抗性愈伤组织分化培养 | 第52-53页 |
| ·抗性转化苗的生根培养 | 第53页 |
| ·转基因阳性植株的PCR 验证 | 第53-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| ·农杆菌的选择 | 第55页 |
| ·愈伤组织状态对转化的影响 | 第55-56页 |
| ·湿度对转化的影响 | 第56页 |
| ·抗生素使用浓度 | 第56页 |
| ·其他影响转基因效率的因素 | 第56-57页 |
| ·转化植株的检测 | 第57-58页 |
| 第五章 结 论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者介绍 | 第66-67页 |
| 导师简介 | 第67页 |
