| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 英文缩写表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 引言 | 第10页 |
| 1. T -2 毒素研究现状 | 第10-19页 |
| ·T-2 毒素的化学组成与理化性质 | 第10-11页 |
| ·T-2 毒素的产生、分离和纯化 | 第11-12页 |
| ·T-2 毒素的危害及致病机理 | 第12-15页 |
| ·T-2 毒素的检测研究 | 第15-19页 |
| ·生物学检测法 | 第16页 |
| ·物理化学法 | 第16-17页 |
| ·免疫学分析法 | 第17-18页 |
| ·T-2 毒素的其他检测法 | 第18页 |
| ·T-2 毒素检测研究的热点和存在问题以及发展趋势 | 第18-19页 |
| 2. 基因工程单链抗体技术 | 第19-24页 |
| ·单链抗体(scFv)的特点 | 第20页 |
| ·抗体可变区基因的获得 | 第20页 |
| ·ScFv 的构建和设计 | 第20-21页 |
| ·噬菌体展示技术基本原理 | 第21页 |
| ·ScFv 的表达 | 第21-22页 |
| ·ScFv 的应用 | 第22-24页 |
| 第二章 噬菌体抗体库的构建和淘选 | 第24-45页 |
| 引言 | 第24页 |
| 材料与方法 | 第24-36页 |
| 1. 材料 | 第24-26页 |
| ·试剂 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·细胞及细胞株 | 第25页 |
| ·质粒载体 | 第25页 |
| ·PCR 引物 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-36页 |
| 结果与分析 | 第36-42页 |
| 1. T -2HS 的制备结果 | 第36页 |
| 2. 效价的测定 | 第36-37页 |
| 3. V_H、V_L 和Linker 基因的扩增 | 第37-38页 |
| 4. ScFv 基因的组装与扩增 | 第38-39页 |
| 5. 噬菌体抗体库的构建 | 第39页 |
| 6. 噬菌体库富集与淘选 | 第39-40页 |
| 7. ScFv 的特异性鉴定 | 第40页 |
| 8. ScFv 的酶切和PCR 验证 | 第40-42页 |
| 讨论 | 第42-44页 |
| 1. 抗原制备 | 第42页 |
| 2. 小鼠免疫与效价测定 | 第42-43页 |
| 3. ScFv 的组装与扩增 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 第三章 T-2 毒素对骨髓瘤细胞毒性的初步研究 | 第45-59页 |
| 引言 | 第45页 |
| 材料与方法 | 第45-50页 |
| 1. 材料 | 第45-46页 |
| · | 第45页 |
| ·仪器及设备 | 第45-46页 |
| ·细胞株 | 第46页 |
| ·PCR 引物 | 第46页 |
| 2. 实验方法 | 第46-50页 |
| ·MTT 比色法检测T-2 毒素对细胞增值的影响[72] | 第46-47页 |
| ·T-2 毒素对细胞形态的影响 | 第47页 |
| ·AnnexinV-PI 法检测细胞凋亡 | 第47页 |
| ·荧光定量PCR 反应 | 第47-49页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第48-49页 |
| ·PCR 引物的设计以及模板的梯度稀释 | 第49页 |
| ·数据统计学处理 | 第49-50页 |
| 结果 | 第50-55页 |
| 1. T -2 毒素对肿瘤细胞增殖的影响 | 第50页 |
| 2. T -2 毒素对肿瘤细胞形态的影响 | 第50-52页 |
| 3. AnnexinV-PI 法检测细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 4. 实时荧光定量PCR 检测Caspase-3 基因mRNA 的变化 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-58页 |
| 1. T-2 毒素对SP2/0 细胞的抑制作用 | 第55页 |
| 2. T-2 毒素诱导肿瘤细胞凋亡 | 第55页 |
| 3. Annexin V-PI 法检测细胞凋亡 | 第55-56页 |
| 4. T-2 毒素对肿瘤细胞Caspase-3 基因表达的作用 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
