| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略表(Abbreviation) | 第10-11页 |
| 1.文献综述 | 第11-21页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒疫苗研究现状 | 第11-18页 |
| ·常规疫苗 | 第11-12页 |
| ·基因工程疫苗 | 第12-17页 |
| ·TGEV基因工程研究存在的问题与展望 | 第17-18页 |
| ·减毒沙门氏菌表达载体研究进展 | 第18-21页 |
| ·携带外源基因的减毒沙门氏菌诱导宿主免疫应答机理 | 第18页 |
| ·减毒沙门氏菌在基因免疫中的应用及前景 | 第18-21页 |
| 2.目的与意义 | 第21-22页 |
| 3.材料与方法 | 第22-39页 |
| ·材料 | 第22-26页 |
| ·质粒、菌株 | 第22-23页 |
| ·细胞与试验动物 | 第23页 |
| ·主要试剂与药品 | 第23-24页 |
| ·主要实验器材 | 第24页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第24-25页 |
| ·引物 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-39页 |
| ·含TGEV主要抗原位点基因的设计与合成 | 第26-27页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第27-28页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第28页 |
| ·PCR或酶切产物的电泳检测 | 第28页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第28-29页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第29页 |
| ·串联多拷贝SLN基因的构建 | 第29-30页 |
| ·质粒的小量制备 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·诱导表达 | 第32页 |
| ·Western blot检测目的蛋白的表达 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第33页 |
| ·沙门氏菌电转化 | 第33-34页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第34页 |
| ·重组疫苗菌株的生物学特性研究 | 第34-35页 |
| ·ELISA方法的建立 | 第35-36页 |
| ·中和试验检测小鼠免疫后的中和抗体 | 第36-37页 |
| ·重组疫苗菌株免疫小鼠试验 | 第37-38页 |
| ·重组疫苗菌株免疫仔猪试验 | 第38-39页 |
| 4.结果与分析 | 第39-48页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒的PCR与酶切鉴定结果 | 第39页 |
| ·重组菌株的构建与鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组菌株的生物学特性 | 第40-42页 |
| ·重组菌株的遗传稳定性 | 第41页 |
| ·重组菌株的生长特性 | 第41页 |
| ·重组菌株的生化特性 | 第41-42页 |
| ·重组菌株的分泌表达 | 第42页 |
| ·免疫小鼠的保护性试验 | 第42-44页 |
| ·免疫小鼠的沙门氏菌抗体检测 | 第42-43页 |
| ·免疫小鼠的rSLN抗体检测 | 第43页 |
| ·免疫小鼠血清IgG抗体亚类测定 | 第43-44页 |
| ·免疫小鼠抗体中和活性检测 | 第44页 |
| ·重组疫苗对猪的免疫效力研究 | 第44-48页 |
| ·重组疫苗免疫猪后抗体检测 | 第44-45页 |
| ·重组疫苗免疫猪后的保护性实验研究 | 第45-48页 |
| 5.讨论 | 第48-54页 |
| ·研究刺激局部免疫新型疫苗的必要性 | 第48-49页 |
| ·合成肽SLN的设计与合成 | 第49-50页 |
| ·Linker的选择 | 第50-51页 |
| ·减毒沙门氏菌asd载体-宿主平衡致死系统 | 第51页 |
| ·SLN基因在减毒沙门氏菌asd载体-宿主平衡致死系统的表达 | 第51-52页 |
| ·重组菌对动物的免疫试验 | 第52-54页 |
| 6.总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-65页 |
| 致谢 | 第65页 |