| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 绪论 | 第12-19页 |
| 第一章 Legumain在神经母细胞瘤中的检测 | 第19-39页 |
| 1.1 材料 | 第19-22页 |
| 1.1.1 材料、试剂 | 第19-21页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.2 方法 | 第22-28页 |
| 1.2.1 NB细胞株中Legumain表达的检测 | 第22-24页 |
| 1.2.2 组织标本Legumain免疫荧光染色 | 第24-25页 |
| 1.2.3 临床神经母细胞瘤组织标本病理芯片legumain免疫组织化学染色 | 第25-26页 |
| 1.2.4 神经母细胞瘤肿瘤患儿血浆的Legumain检测 | 第26-27页 |
| 1.2.5 荷瘤小鼠模型主要组织器官legumain免疫组织化学染色 | 第27-28页 |
| 1.3 结果 | 第28-37页 |
| 1.3.1 Legumain在NB中的表达和定位 | 第28-29页 |
| 1.3.2 Legumain在肿瘤标本中的表达和分布 | 第29-35页 |
| 1.3.3 神经母细胞瘤患儿血样中Legumain表达量增加 | 第35-36页 |
| 1.3.4 主要组织器官Legumain的表达和分布 | 第36-37页 |
| 1.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第二章 Legumain 通过上皮间质转化影响 NB 侵袭和迁移 | 第39-66页 |
| 2.1 材料 | 第39-42页 |
| 2.1.1 材料、试剂 | 第39-41页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 2.2 方法 | 第42-52页 |
| 2.2.1 Western-blot半定量分析儿童肿瘤标本中Legumain表达与N-cadherin表达的相关性 | 第42-44页 |
| 2.2.2 legumain促肿瘤侵袭和迁移能力鉴定 | 第44-52页 |
| 2.2.2.1 细胞培养 | 第44-45页 |
| 2.2.2.2 划痕实验 | 第45页 |
| 2.2.2.3 Transwell侵袭和迁移实验 | 第45-46页 |
| 2.2.2.4 Legumain siRNA的转染对NB侵袭和迁移的影响 | 第46-47页 |
| 2.2.2.5 Legumain过表达质粒转染 | 第47-49页 |
| 2.2.2.6 外源加入rhLegumain和AEPI干预实验 | 第49页 |
| 2.2.2.7 Western blotting检测legumain基因过表达或敲除后EMT标志物变化以及加入rhLegumain或AEPI后EMT标志物变化 | 第49-52页 |
| 2.3 结果 | 第52-64页 |
| 2.3.1 人神经母细胞瘤临床标本Legumain活性形式&N-cadherin表达相关性分析 | 第52-53页 |
| 2.3.2 Legumain基因敲除降低NB侵袭和迁移、阻碍EMT的发生 | 第53-59页 |
| 2.3.3 Legumain基因过表达促进NB侵袭和迁移以及EMT标志物的发生 | 第59-62页 |
| 2.3.4 rhLegumain蛋白和抑制剂AEPI对NB的影响 | 第62-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-66页 |
| 第三章 基于Legumain的靶向前体药物在神经母细胞瘤中的作用效果评估 | 第66-86页 |
| 3.1 材料 | 第66-68页 |
| 3.1.1 材料、试剂 | 第66-67页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第67-68页 |
| 3.2 方法 | 第68-73页 |
| 3.2.1 EMC-AANL-DOX的合成和验证 | 第68-69页 |
| 3.2.2 EMC-AANL-DOX的体外酶切实验和细胞摄取实验 | 第69-70页 |
| 3.2.3 EMC-AANL-DOX的动物实验 | 第70-73页 |
| 3.3 结果 | 第73-84页 |
| 3.3.1 EMC-AANL-DOX的验证 | 第73-74页 |
| 3.3.2 EMC-AANL-DOX体外酶切实验和细胞摄取实验 | 第74-79页 |
| 3.3.2.1 rhLegumain不同PH激活条件下的体外酶切实验 | 第74-75页 |
| 3.3.2.2 EMC-AANL-DOX的体外酶切实验 | 第75-77页 |
| 3.3.2.3 体外细胞摄取EMC-AANL-DOX实验 | 第77-79页 |
| 3.3.3 EMC-AANL-DOX较DOX本身更好的作用和更低的毒副作用 | 第79-84页 |
| 3.3.3.1 肿瘤生长抑制和动物生存周期 | 第79-80页 |
| 3.3.3.2 毒性反应 | 第80-84页 |
| 3.4 讨论 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 学术论文和科研成果 | 第97-99页 |
