| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 英文缩写 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| ·番茄简介 | 第11页 |
| ·番茄病害类型 | 第11-12页 |
| ·番茄白粉病简介 | 第12页 |
| ·番茄抗白粉病研究进展 | 第12-13页 |
| ·VIGS 及其应用 | 第13-15页 |
| ·RNAI 发现历程及其作用机理 | 第13-14页 |
| ·VIGS 与基因功能验证 | 第14-15页 |
| ·研究目的、意义、内容与技术路线 | 第15-17页 |
| ·研究目的与意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·番茄VIGS 体系构建 | 第15页 |
| ·抗番茄白粉病相关基因DL-II-C1 的VIGS 鉴定 | 第15-16页 |
| ·技术路线 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-32页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·病毒质粒载体 | 第17-18页 |
| ·PTV00 载体 | 第17页 |
| ·TRV-LIC 载体 | 第17-18页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第18页 |
| ·缓冲液及其它溶液配方 | 第18-19页 |
| ·液体培养基和固体培养基 | 第19页 |
| ·电泳胶的配制 | 第19页 |
| ·主要设备和仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-32页 |
| ·番茄总RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·准备工作 | 第20页 |
| ·番茄总RNA 提取方法 | 第20-21页 |
| ·PCR 引物设计 | 第21-22页 |
| ·番茄PDS 基因引物 | 第21页 |
| ·内参ACTIN 引物 | 第21页 |
| ·番茄DL-II-C1 基因引物 | 第21-22页 |
| ·CDNA 的合成 | 第22页 |
| ·PCR 反应扩增目的基因片段 | 第22-23页 |
| ·PCR 反应扩增PDS 基因片段 | 第22页 |
| ·PCR 反应扩增DL-II-C1 基因片段 | 第22-23页 |
| ·PCR 反应扩增内参基因片段 | 第23页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物鉴定 | 第24-27页 |
| ·目的片段与PMD18-T 载体的连接 | 第24-25页 |
| ·感受态大肠杆菌的制备和转化 | 第25页 |
| ·质粒抽提 | 第25-27页 |
| ·基因沉默载体的构建 | 第27-30页 |
| ·重组PTV00 载体的构建 | 第27-28页 |
| ·重组TRV2-LIC 载体的构建 | 第28-30页 |
| ·基因沉默载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组PTV00 载体的鉴定 | 第30页 |
| ·重组TRV2-LIC 载体的鉴定 | 第30-31页 |
| ·接种与检测 | 第31-32页 |
| ·PDS-VIGS 接种与检测 | 第31页 |
| ·DL-II-C1-VIGS 接种与检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-38页 |
| ·目的基因片段的克隆与鉴定 | 第32-33页 |
| ·PDS 基因片段的克隆与鉴定 | 第32页 |
| ·DL-II-C1 基因片段的克隆与鉴定 | 第32-33页 |
| ·VIGS 载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| ·PDS-VIGS 载体的构建与鉴定 | 第33页 |
| ·DL-II-C1-VIGS 载体的构建与鉴定 | 第33-35页 |
| ·VIGS 结果与检测 | 第35-38页 |
| ·pTV00-PDS 基因沉默结果与检测 | 第35-37页 |
| ·沉默表型观察 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第36-37页 |
| ·TRV-LIC-DL-II-C1 基因沉默结果与检测 | 第37-38页 |
| ·沉默表型观察 | 第37-38页 |
| ·番茄白粉菌扫描电子显微镜检测结果 | 第38页 |
| 4 讨论 | 第38-43页 |
| ·有关VIGS 体系的各个环节 | 第38-42页 |
| ·TRV 载体的优越性 | 第38-39页 |
| ·VIGS 技术优越性探讨 | 第39-40页 |
| ·VIGS 技术局限性探讨 | 第40-41页 |
| ·VIGS 接种方法探讨 | 第41页 |
| ·影响VIGS 的因素 | 第41-42页 |
| ·最适VIGS 条件与番茄白粉病菌生长条件探讨 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 6 后续工作 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附注：已发表论文 | 第53页 |