| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 鱼类先天免疫系统 | 第12-13页 |
| 1.2 炎症小体 | 第13-16页 |
| 1.3 炎症小体关键组件ASC蛋白 | 第16-20页 |
| 1.3.1 ASC的组成 | 第17页 |
| 1.3.2 PYD和CARD在炎症小体组装中发挥的功能 | 第17-18页 |
| 1.3.3 ASC的功能 | 第18-19页 |
| 1.3.4 胞外ASC释放和入侵的机制 | 第19-20页 |
| 1.3.5 胞外ASC斑点的生理功能 | 第20页 |
| 1.4 本课题的主要内容和意义 | 第20-23页 |
| 第2章 大菱鲆炎症小体基因的克隆 | 第23-40页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 大菱鲆的暂养和取样 | 第24页 |
| 2.3.2 RNA的抽提 | 第24-25页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| 2.3.4 连接、大肠杆菌的转化及菌落验证 | 第25-26页 |
| 2.3.5 RACE操作步骤 | 第26-29页 |
| 2.3.6 生物信息学分析软件 | 第29页 |
| 2.4 实验结果 | 第29-39页 |
| 2.4.1 大菱鲆SmGSDME基因的克隆 | 第29-30页 |
| 2.4.2 大菱鲆caspase-3基因的克隆 | 第30-32页 |
| 2.4.3 大菱鲆SmASC基因的克隆 | 第32-39页 |
| 2.5 讨论与小结 | 第39-40页 |
| 第3章 大菱鲆SmASC基因的功能 | 第40-47页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40页 |
| 3.2.1 菌株、质粒、培养基和培养条件 | 第40页 |
| 3.2.2 试剂 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-44页 |
| 3.3.1 真核表达质粒构建 | 第41页 |
| 3.3.2 无内毒素质粒抽提 | 第41-42页 |
| 3.3.3 真核细胞表达质粒转染 | 第42页 |
| 3.3.4 有机溶剂收蛋白 | 第42-43页 |
| 3.3.5 免疫荧光 | 第43页 |
| 3.3.6 DSS交联 | 第43页 |
| 3.3.7 蛋白电泳胶的配置 | 第43-44页 |
| 3.3.8 Western-blot | 第44页 |
| 3.4 实验结果 | 第44-46页 |
| 3.4.1 SmASC过表达免疫荧光分析 | 第44页 |
| 3.4.2 SmASC蛋白纯化后DSS交联分析 | 第44-46页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第46-47页 |
| 第4章 大菱鲆SmASC基因在抗细菌感染中的作用 | 第47-58页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和培养条件 | 第47-48页 |
| 4.2.2 缓冲液 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 4.3.1 杀鱼爱德华氏菌的培养 | 第48页 |
| 4.3.2 感染 | 第48-49页 |
| 4.3.3 敲降质粒及过表达质粒的构建 | 第49页 |
| 4.3.4 过表达质粒的构建 | 第49页 |
| 4.3.5 荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 4.3.6 杀鱼爱德华氏菌的培养和感染 | 第50页 |
| 4.3.7 对siRNA敲降效果及过表达效果的验证 | 第50页 |
| 4.3.8 定植实验 | 第50-51页 |
| 4.4 实验结果 | 第51-56页 |
| 4.4.1 SmASC在不同组织中的表达量分析 | 第51-52页 |
| 4.4.2 杀爱德华氏菌感染激活SmASC表达 | 第52-53页 |
| 4.4.3 鳗弧菌感染激活SmASC表达 | 第53-54页 |
| 4.4.4 大菱鲆SmASC基因的活体敲降和过表达分析 | 第54页 |
| 4.4.5 敲降和过表达SmASC后对杀鱼爱德华氏菌定植的影响 | 第54-56页 |
| 4.5 讨论与小结 | 第56-58页 |
| 第5章 EseH对HKMs细胞IκBα磷酸化的影响 | 第58-60页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 实验材料 | 第58页 |
| 5.3 实验方法 | 第58-59页 |
| 5.3.1 分离大菱鲆HKM细胞 | 第58页 |
| 5.3.2 细菌侵染HKM细胞 | 第58-59页 |
| 5.4 实验结果 | 第59页 |
| 5.4.1 EseH在侵染水平不影响HKM细胞IκBα的磷酸化 | 第59页 |
| 5.5 讨论与小结 | 第59-60页 |
| 第6章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 6.1 结论 | 第60页 |
| 6.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第68页 |
| 攻读硕士学位期间参加会议 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
