| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 缩略语表 | 第16-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-36页 |
| 1.1 乳腺癌的研究现状 | 第18-20页 |
| 1.1.1 乳腺癌的现状及发病原因 | 第18页 |
| 1.1.2 乳腺癌的治疗方法 | 第18-20页 |
| 1.2 微管靶向药物的研究进展 | 第20-25页 |
| 1.2.1 微管的结构特点 | 第20-21页 |
| 1.2.2 微管的生物学特性 | 第21-22页 |
| 1.2.3 靶向微管的抗肿瘤药物的分类 | 第22-25页 |
| 1.2.4 微管靶向药物的耐药 | 第25页 |
| 1.3 MDM2蛋白在癌症发生发展中的作用 | 第25-30页 |
| 1.3.1 MDM2-p53负反馈环 | 第25-27页 |
| 1.3.2 MDM2独立于p53的致癌活性 | 第27-28页 |
| 1.3.3 MDM2的过表达与乳腺癌 | 第28-29页 |
| 1.3.4 抑制MDM2蛋白表达在肿瘤治疗中的应用前景 | 第29-30页 |
| 1.4 CA-4类化合物研究现状 | 第30-34页 |
| 1.4.1 CA-4类化合物的发现 | 第30页 |
| 1.4.2 CA-4类似物的构效关系研究及临床研究现状 | 第30-31页 |
| 1.4.3 CA-4化合物的抗肿瘤作用机制 | 第31-34页 |
| 1.5 本研究的立题依据 | 第34-36页 |
| 第2章 SQ体内、体外抗乳腺癌作用研究 | 第36-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 药品与试剂 | 第37页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第37页 |
| 2.1.3 细胞株 | 第37页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第37-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第39页 |
| 2.2.2 使用MTT法考察SQ对多种人肿瘤细胞的生长抑制作用 | 第39页 |
| 2.2.3 SQ作用于乳腺癌细胞的时-效、量-效关系曲线 | 第39页 |
| 2.2.4 克隆形成试验考察SQ对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第39-40页 |
| 2.2.5 SQ对MCF-7荷瘤裸鼠的体内抗乳腺癌试验 | 第40-41页 |
| 2.2.6 肿瘤组织的石蜡包埋及切片 | 第41页 |
| 2.2.7 H&E染色分析 | 第41-42页 |
| 2.2.8 数据结果的统计与分析 | 第42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-46页 |
| 2.3.1 SQ对多种肿瘤细胞均具有增殖抑制作用 | 第42页 |
| 2.3.2 SQ时间和剂量依赖的抑制乳腺癌细胞的增殖 | 第42-44页 |
| 2.3.3 SQ抑制荷MCF-7裸鼠移植瘤的生长 | 第44-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-47页 |
| 2.5 小结 | 第47-48页 |
| 第3章 SQ靶向作用于微管继而诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究 | 第48-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.1.1 药品与试剂 | 第49-50页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第50页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-55页 |
| 3.2.1 SQ对体外微管蛋白聚合的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.2 通过激光共聚焦显微镜检测SQ对细胞微管的影响 | 第51页 |
| 3.2.3 免疫印迹法分析SQ对细胞内微管蛋白聚合的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.4 流式细胞术分析SQ对细胞周期的影响 | 第52页 |
| 3.2.5 细胞形态及细胞核形态的观察 | 第52页 |
| 3.2.6 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第52-53页 |
| 3.2.7 通过透射电镜观察细胞凋亡 | 第53页 |
| 3.2.8 流式细胞术检测细胞内ROS的变化 | 第53页 |
| 3.2.9 蛋白免疫印迹法考察蛋白变化 | 第53-54页 |
| 3.2.10 使用MTT法测定抑制剂对SQ处理的细胞活力的影响 | 第54页 |
| 3.2.11 siRNA转染干扰目的蛋白的表达 | 第54页 |
| 3.2.12 数据统计分析 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-69页 |
| 3.3.1 SQ在体外直接抑制微管蛋白聚合 | 第55页 |
| 3.3.2 SQ在细胞水平抑制微管蛋白聚合 | 第55-57页 |
| 3.3.3 SQ诱导乳腺癌细胞G2/M期周期阻滞 | 第57-60页 |
| 3.3.4 SQ诱导乳腺癌细胞凋亡 | 第60-62页 |
| 3.3.5 SQ诱导的乳腺癌细胞凋亡是caspase依赖的 | 第62-63页 |
| 3.3.6 SQ诱导的乳腺癌细胞凋亡是p53非依赖的 | 第63-65页 |
| 3.3.7 SQ诱导的细胞凋亡与下调PI3K-Akt-MDM2通路有关 | 第65-67页 |
| 3.3.8 SQ诱导的乳腺癌细胞凋亡与ROS有关 | 第67-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-71页 |
| 3.5 小结 | 第71-72页 |
| 第4章 SQ降解MDM2蛋白引起乳腺癌细胞凋亡的机制研究 | 第72-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 4.1.1 药品与试剂 | 第72-73页 |
| 4.1.2 细胞株 | 第73页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-76页 |
| 4.2.1 MTT法测定siMDM2对SQ处理的细胞活力的影响 | 第73页 |
| 4.2.2 蛋白免疫印迹分析蛋白表达 | 第73页 |
| 4.2.3 免疫荧光法观察目的蛋白表达 | 第73-74页 |
| 4.2.4 免疫组织化学分析裂解形式PARP-1的表达 | 第74页 |
| 4.2.5 免疫共沉淀法考察蛋白-蛋白相互作用 | 第74页 |
| 4.2.6 分子模拟对接预测SQ与MDM2的关系 | 第74-75页 |
| 4.2.7 实时定量荧光PCR (Real-time PCR)考察mRNA变化 | 第75-76页 |
| 4.2.8 数据统计分析 | 第76页 |
| 4.3 实验结果 | 第76-83页 |
| 4.3.1 SQ诱导的MDM2降解是p53非依赖的 | 第76-78页 |
| 4.3.2 SQ对MDM2蛋白稳定性的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.3 SQ激活MCF-7细胞中的p53蛋白是通过多种机制实现的 | 第79-81页 |
| 4.3.4 SQ诱导的细胞凋亡与降解MDM2有关 | 第81-82页 |
| 4.3.5 SQ在体内能降低MDM2的表达以及引起细胞凋亡 | 第82-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.5 小结 | 第84-85页 |
| 第5章 SQ诱导乳腺癌细胞产生保护性自噬和非保护性自噬 | 第85-96页 |
| 5.1 实验材料 | 第86页 |
| 5.1.1 药品与试剂 | 第86页 |
| 5.1.2 细胞株 | 第86页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第86页 |
| 5.2 实验方法 | 第86-88页 |
| 5.2.1 通过透射电镜观察细胞自噬 | 第86页 |
| 5.2.2 使用MDC染色法检测酸性自噬小泡 | 第86-87页 |
| 5.2.3 免疫荧光染色法观察LC3亮斑 | 第87页 |
| 5.2.4 免疫印迹法考察自噬相关蛋白的变化 | 第87页 |
| 5.2.5 MTT法检测自噬抑制剂对SQ处理的细胞活力的影响 | 第87页 |
| 5.2.6 Annexin V/PI染色检测细胞凋亡 | 第87-88页 |
| 5.2.7 siRNA转染干扰目的蛋白的表达 | 第88页 |
| 5.2.8 数据统计分析 | 第88页 |
| 5.3 实验结果 | 第88-91页 |
| 5.3.1 SQ诱导乳腺癌细胞自噬 | 第88-90页 |
| 5.3.2 SQ在MCF-7和MDA-MB-231细胞中诱导产生不同的自噬作用 | 第90-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-95页 |
| 5.5 结论 | 第95-96页 |
| 全文结论 | 第96-97页 |
| 研究的意义及创新点 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 个人简历 | 第109-110页 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 附件 | 第113-135页 |
